2型糖尿病和阿爾茨海默病與氧化應激相關的研究.pdf

1、本文從以下幾部分進行論述：
　　第一部分 2型糖尿病患者的尿液中蛋白多肽的分析
　　目的:對2型糖尿病(type2 diabetes mellitus，T2DM)患者及健康人尿液中的多肽進行定量和定性分析，尋找能夠有效區(qū)分T2DM患者和健康人的標志性蛋白，并為T2DM的氧化應激機制和炎癥機制提供有關蛋白多肽組學的證據。
　　方法:用無菌瓶留取20例T2DM患者和22例正常人的空腹清潔中段晨尿5-10ml，4℃保存，2h

2、內放入-80℃的冰箱中保存。先對尿液中的多肽進行富集，然后進行在線反相液相色譜分離和串聯(lián)質譜分析，獲得的原始質譜圖導入到ProteinPilot軟件(v4.5)進行數據庫檢索比對分析，從而鑒定蛋白質。
　　結果:(1)在T2DM患者的尿液中測得816條多肽，對應100種蛋白。在正常人的尿液中測得1048條多肽，對應133種蛋白。兩組尿液中多肽的含量和種類有差異，對應的主要蛋白也不同。(2)與正常人比較，在T2DM患者的尿液中顯著增

3、加的多肽對應的蛋白為轉甲狀腺素蛋白(Transthyretin，TTR)、載脂蛋白A-Ⅰ(Apolipoprotein A-Ⅰ，ApoA-Ⅰ)、骨橋蛋白(Osteopontin，OPN)、載脂蛋白A-Ⅳ(Apolipoprotein A-Ⅳ, ApoA-Ⅳ)、補體C3(Complement C3，C3)、血漿銅藍蛋白。其中T2DM患者尿液中TTR、OPN、血漿銅藍蛋白、ApoA-Ⅳ的對應的多肽含量分別為正常人的6倍、4.6倍、3.8倍和

4、3.5倍。ApoA-Ⅰ、C3的肽段在T2DM患者尿液中的含量分別排列在第5和第8位，而在正常人的尿液中未檢出。(3)質譜分析的結果顯示部分肽段是T2DM患者尿液中所特有的。以TTR為例，在T2DM患者尿液中特有的TTR多肽序列有:AALLSPYSYSTTAVVTNPKE;AGPTGTGESKCPLMVKVLDAVRGSPAINV;AGPTGTGESKCPLMVKVLDAVRGSPAINVAVHVFR;ALGISPFHEHAEVVFTAN

5、D SGPRRY;ALGISPFHEHAEVVFTANDSGPRRYT等等。這些多肽測得的實際分子量波動在1180.636Da至4020.975Da之間，與理論值有誤差，誤差很小，波動在-0.02552Da至0.01659Da之間。
　　結論:尿液中的TTR、ApoA-Ⅰ、OPN、ApoA-Ⅳ、C3、血漿銅藍蛋白可能可以作為區(qū)分T2DM患者和健康人的標志性蛋白。根據已有的研究推測TTR、OPN、 C3、血漿銅藍蛋白的含量增加，可能

6、與T2DM患者體內炎癥與氧化應激水平增加有關。
　　第二部分 硒對阿爾茨海默病神經細胞的死亡具有抗氧化保護作用
　　目的:探討硒對4-羥基壬烯酸(HNE)和β淀粉樣蛋白(Aβ)誘導的神經細胞死亡率的影響及其抗氧化應激作用。
　　方法:共有九組原代大鼠胚胎海馬神經細胞置常規(guī)培養(yǎng)液中，其中一組未添加任何處理的細胞為未處理1組，另有三組細胞分別置于0、100和200nmol/L的亞硒酸鈉中處理24h，再加HNE處理24h，分

7、別為對照1組、亞硒酸鈉A、B組;另外還有一組細胞未進行任何處理為未處理2組，剩下四組海馬神經細胞分別置于0、200、500和1000nmol/L亞硒酸鈉中處理24h，再加Aβ42處理24h，分別為對照2組、亞硒酸鈉C、D、和E組。采用錐蟲藍染色和細胞形態(tài)學檢測以上各組海馬神經細胞的死亡率。共有四組人神經母細胞瘤細胞(SH-SY5Y)置于培養(yǎng)液中;其中一組未進行任何處理為空白組，其他四組細胞分別置于0、50、100和200nmkl/L亞硒

8、酸鈉中處理24h，再加入HNE處理24h，分別為對照3組、亞硒酸鈉A1、B1和C1組。采用熒光燃料H2DCF-DA檢測細胞活性氧的水平。
　　結果:與未處理1組和2組比較，對照1組、對照2組細胞死亡率明顯增加(P＜0.05);與對照1組比較，亞硒酸鈉A、B組細胞死亡率明顯下降(P＜0.05)，和對照2組比較，亞硒酸鈉C、D和E組細胞死亡率明顯降低(P＜0.05)。與空白組比較，對照3組細胞活性氧水平明顯升高(P＜0.05);與對照