基于兩親性聚磷酸酯-聚乳酸共聚物腫瘤靶向納米對(duì)比劑的研究.pdf

1、聚磷酸酯是一類生物相容性好、可生物降解的親水性高分子材料，直鏈聚磷酸酯具有柔性和親水性好、降解時(shí)間短等特點(diǎn)；聚乳酸是一類生物相容性好、可生物降解的疏水性高分子材料，已作為藥用輔料被FDA批準(zhǔn)，具有剛性強(qiáng)、降解時(shí)間長(zhǎng)等特點(diǎn)。本文通過(guò)開(kāi)環(huán)聚合反應(yīng)合成了新型聚磷酸酯-聚乳酸兩親性嵌段共聚物（PAEEP-PLLA），利用適宜分子量和聚磷酸酯/聚乳酸嵌段比的PAEEP-PLLA為載體材料，分別制備了載全氟戊烷的PAEEP-PLLA納米泡和載超順磁

2、性納米Fe3O4的磁性PAEEP-PLLA納米粒，并將乳鐵蛋白（Lf）作為靶向因子與納米泡和磁性納米粒共價(jià)偶聯(lián)，將Lf偶聯(lián)的納米泡應(yīng)用于腫瘤靶向超聲成像，Lf偶聯(lián)的磁性納米粒應(yīng)用于腫瘤靶向磁共振成像（MRI）。開(kāi)展的主要研究工作如下：
　?。?）通過(guò)開(kāi)環(huán)聚合反應(yīng)合成了兩親性PAEEP-PLLA嵌段共聚物。主要合成路線為：用胺基保護(hù)的乙醇胺做引發(fā)劑，辛酸亞錫為催化劑，開(kāi)環(huán)聚合丙交酯，得到一端是羥基，另一端是胺基封端的聚乳酸；用胺基封

3、端的聚乳酸為引發(fā)劑，辛酸亞錫為催化劑，開(kāi)環(huán)聚合2-(N-叔丁氧羰基胺基)乙氧基-2-氧-1,3,2-二氧磷雜環(huán)戊烷單體，脫掉保護(hù)基得到 PAEEP-PLLA共聚物。采用 NMR、FTIR、GPC和 DSC等方法對(duì)PAEEP-PLLA共聚物的化學(xué)結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)進(jìn)行了確證和表征。
　　（2）采用復(fù)乳-溶劑揮發(fā)法制備了包載液態(tài)全氟戊烷的PAEEP-PLLA納米泡（PAEEP-PLLA-NBs），通過(guò)琥珀酰亞胺酯和馬來(lái)酰亞胺封端的聚乙二醇

4、將Lf與納米泡通過(guò)共價(jià)鍵進(jìn)行偶聯(lián)，得到Lf偶聯(lián)的納米泡Lf-PAEEP-PLLA-NBs。采用FTIR和凝膠電泳實(shí)驗(yàn)證實(shí) Lf通過(guò)共價(jià)鍵偶聯(lián)到納米泡的表面，偶聯(lián) Lf的濃度是0.297 mg/mL。激光粒度儀測(cè)定Lf-PAEEP-PLLA-NBs粒徑為328.4±5.1 nm，多分散系數(shù)（PDI）為0.167±0.020，zeta電位為-12.6±0.3 mV。TEM表征顯示納米泡形態(tài)呈較規(guī)整的球狀和明顯核殼結(jié)構(gòu)。Lf-PAEEP-PL

5、LA-NBs置于4℃冰箱中放置3個(gè)月粒徑?jīng)]有明顯變化，證明其穩(wěn)定性良好。細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)和溶血實(shí)驗(yàn)證明Lf-PAEEP-PLLA-NBs具有較好的生物相容性。細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)表明Lf-PAEEP-PLLA-NBs與腦膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞具有特異親和性。體外超聲研究表明，納米泡在超聲波輻照下液態(tài)全氟戊烷發(fā)生氣化，粒徑變大，具有穩(wěn)定的體外超聲成像能力。裸鼠皮下瘤在體超聲成像研究表明，納米泡體內(nèi)穩(wěn)定超聲成像時(shí)間可達(dá)120 min，是市售Sonovue微泡的

6、10倍，同時(shí)，腫瘤組織超聲成像均一、清晰。
　?。?）采用高溫裂解法制備了單分散性好的油胺包裹超順磁性Fe3O4納米粒，粒徑為10.6±0.3 nm。以PAEEP-PLLA共聚物為載體材料，采用超聲乳化法制備了包載Fe3O4納米粒的磁性PAEEP-PLLA納米粒M-PAEEP-PLLA-NPs，將Lf通過(guò)共價(jià)鍵偶聯(lián)到磁性納米粒表面，得到 Lf偶聯(lián)的磁性納米粒 Lf-M-PAEEP-PLLA-NPs。激光粒度儀測(cè)定Lf-M-PAEE

7、P-PLLA-NPs粒徑為318.2±0.4 nm，PDI為0.192±0.021，zeta電位為?10.6±0.4 mV。TEM表征顯示Lf-M-PAEEP-PLLA-NPs形態(tài)呈較規(guī)整的球狀，F(xiàn)e3O4納米粒均勻分布在 Lf-M-PAEEP-PLLA-NPs中。細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)證明 Lf-M-PAEEP-PLLA-NPs具有較好的生物相容性。與C6細(xì)胞和ECV304細(xì)胞孵育結(jié)果表明Lf-M-PAEEP-PLLA-NPs具有良好的腦膠質(zhì)瘤

8、細(xì)胞靶向性。Lf-M-PAEEP-PLLA-NPs的磁飽和強(qiáng)度為74.8 emu/g Fe，具有超順磁性。體外MR結(jié)果表明中，M-PAEEP-PLLA-NPs和 Lf-M-PAEEP-PLLA-NPs的弛豫率分別為167.17 mM-1s-1和151.03 mM-1s-1。腦膠質(zhì)瘤模型大鼠在體MRI結(jié)果表明，Lf-M-PAEEP-PLLA-NPs使腫瘤組織的T2加權(quán)MR信號(hào)迅速降低，而且隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，信號(hào)降低的范圍擴(kuò)大，成像時(shí)間持續(xù)4