沙門氏菌快速檢測技術(shù)方法學(xué)評估及臨床應(yīng)用研究.pdf

1、目的：對四種快速新型的沙門氏菌檢測方法進行評估、比較及其臨床應(yīng)用研究，同時探索能夠?qū)ι抽T氏菌快速鑒定、分型、分析的最佳方法并建立和優(yōu)化臨床標(biāo)本檢測流程。
　　方法：以生化反應(yīng)聯(lián)合血清凝集法為標(biāo)準方法分別對膠體金法、質(zhì)譜法、16S rDNA法、CLSPT法結(jié)果、方法學(xué)、臨床應(yīng)用進行研究、比較和評估。應(yīng)用沙門氏菌膠體金法試劑對65例臨床腹瀉患者糞便標(biāo)本（其中沙門菌屬感染20例，非沙門菌感染45例）及44株純培養(yǎng)的沙門菌屬菌懸液進行檢測

2、，評價膠體金試劑的檢測性能。同時應(yīng)用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜(Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization-Time of Flight MassSpectrometry,MALDI-TOF-MS)16SrDNA、CLSPT(Clustered regularlyinterspaced short palindromic repeats locus spacer pair typing，

3、CLSPT)方法對上述分離和純培養(yǎng)的64株已知的沙門菌進行檢測，統(tǒng)計鑒定符合率，并對各方法進行比較分析。
　　結(jié)果：膠體金法敏感性100％，特異性98.7％，準確度99.3％，最低檢出限1×106 cfu· ml-1;試劑可實現(xiàn)A～E不同亞群沙門氏菌檢測，與其他腸道腹瀉致病菌無交叉反應(yīng)，且在4℃和37℃避光保存6個月，檢測結(jié)果未發(fā)生改變。該檢測試劑聯(lián)合快速亞硒酸鹽胱氨酸(SC)增菌液能夠很好的提高沙門菌檢出率。質(zhì)譜技術(shù)，質(zhì)譜儀對沙

4、門菌的屬水平鑒定率達100％(64/64);血清型水平上，腸炎沙門菌符合率97.22％(35/36)，鼠傷寒沙門菌為100％(17/17)。CLSPT結(jié)果，擴增片段在750bp左右，64株沙門菌經(jīng)CLSPT方法檢測結(jié)果腸炎沙門菌34株，堿基匹配率為97％-100％，鑒定符合率94.44％(34/36);鼠傷寒沙門符合率100％(17/17)。甲型副傷寒100％(2/2)，乙型副傷寒100％(2/2)。16 srDNA結(jié)果，PCR片段堿基

5、長度1500bp左右，檢測出腸炎沙門菌35株，堿基匹配率為99％-100％，鑒定符合率97.22％(35/36);鼠傷寒沙門菌17株，鑒定符合率100％(17/17)。四種方法在屬水平鑒定符合率無顯著差異(P＞0.05)，在種水平上MALDI-TOF-MS、16SrDNA、CLSPT方法鑒定符合率無顯著差異(P＞0.05)，三種方法有較高的一致率，和比較滿意的一致性。膠體金法與質(zhì)譜技術(shù)法最為節(jié)省時間（見表4-9）。如兩種方法聯(lián)合應(yīng)用可為

6、臨床提供快速準確報告，具有重要意義。
　　結(jié)論：膠體金法使用非常方便，檢測速度非?？欤荒軐⑸抽T菌鑒定到屬水平;質(zhì)譜技術(shù)無論在屬水平還是種水平都有較好的鑒定結(jié)果，且具有強大的數(shù)據(jù)分析能力，速度也非?？?CLSPT基于成簇的規(guī)律間隔的短回文重復(fù)序列(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats，CRISPR)分型方法的改進方法，即CRISPR位點間隔序列分型(C

7、LSPT)法分析位點簡化、簡單方便、準確率高，但結(jié)果影響因素多檢測時間長;16srDNA法，雖然很快很準但對沙門氏菌種間堿基分辨率較差。膠體金法和MALDI-TOF-MS法均為目前最為快速的沙門菌檢測方法，膠體金法最適用于快速初篩檢測且準確可靠，可為臨床提供快速的初步報告，為患者的快速診療提供主要方向，質(zhì)譜技術(shù)最適用于快速鑒定、分型、數(shù)據(jù)分析，可快速的為臨床提供詳細的病原信息及分析工具，如兩者聯(lián)合應(yīng)用，可互為補充，大大提高臨床標(biāo)本的檢測