Ndfip1對奧沙利鉑誘導的神經母細胞瘤細胞凋亡的保護作用.pdf

1、研究表明，在帕金森病患者腦組織中發(fā)現(xiàn)有大量的神經元發(fā)生程序性死亡，即細胞凋亡，有關實驗證明，神經細胞損傷后高表達的Ndfip1蛋白，可與Nedd4家族蛋白結合，通過泛素化清除錯誤折疊的蛋白，進而抑制神經細胞的凋亡。本實驗采用了人神經母細胞瘤SH-SYSY細胞及過表達Ndfip1蛋白的SN-MC-1細胞作為研究對象，通過奧沙利鉑誘導細胞凋亡，研究在Ndfip1蛋白過表達情況下對SH-SY5Y細胞增殖和凋亡的影響，探討Ndfip1對神經細胞

2、的保護作用。
　　第一部分 穩(wěn)定轉染Ndfip1的SH-SY5Y細胞的鑒定。
　　首先通過對實驗室凍存細胞的復蘇，傳代以獲得穩(wěn)定生長的SH-SY5Y和SN-MC-1細胞，同時通過Western Blot法對SN-MC-1細胞蛋白表達進行鑒定，確認獲得穩(wěn)定可控的Ndfip1蛋白表達，供本次實驗所用，并通過細胞凍存，使得細胞株得以延續(xù)。
　　第二部分 Ndfip1對奧沙利鉑誘導的SH-SY5Y細胞凋亡的保護作用。
　

3、　首先，選取典型抗腫瘤藥物奧沙利鉑，作用于SH-SY5Y細胞，通過MTT比色法，鑒別經不同藥物濃度及不同作用時間作用后對細胞生存率的影響情況，并對數據進行分析，得出半數有效抑制濃度;然后通過加入4-HT誘導SN-MC-1細胞大量表達Ndfip1蛋白，經MTT比色法可觀察到Ndfip1蛋白高表達后的SH-SY5Y細胞較野生型細胞增殖抑制率有所下降，推斷Ndfip1蛋白能夠對抗奧沙利鉑對SH-SY5Y細胞的增殖抑制作用。最后利用流式細胞儀技

4、術檢測單獨應用奧沙利鉑誘導的細胞凋亡水平，以及過表達的Ndfip1蛋白對奧沙利鉑誘導細胞凋亡的影響，同時對兩組數據進行分析，結果提示Ndfip1蛋白對奧沙利鉑誘導的SH-SY5Y細胞凋亡具有保護作用，同時檢測到凋亡蛋白Caspase-3表達的減少，進一步表明Ndfip1蛋白可能通過抗凋亡作用實現(xiàn)其神經保護作用。
　　綜上，本實驗佐證了Ndfip1蛋白對神經細胞的保護作用，表明其可能對帕金森病的治療具有潛在的正性作用，進一步研究其抗