乙型肝炎病毒DNAX蛋白突變預(yù)測(cè)乙肝相關(guān)性肝細(xì)胞肝癌患者術(shù)后生存率的研究.pdf

1、河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)及知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本學(xué)位論文在導(dǎo)師( 或指導(dǎo)小組) 的指導(dǎo)下，由本人獨(dú)立完成。本學(xué)位論文研究所獲得的研究成果，其知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。河北醫(yī)科大學(xué)有權(quán)對(duì)本學(xué)位論文進(jìn)行交流、公開(kāi)和使用。凡發(fā)表與學(xué)位論文主要內(nèi)容相關(guān)的論文，第一署名為單位河北醫(yī)科大學(xué)，試驗(yàn)材料、原始數(shù)據(jù)、申報(bào)的專利等知識(shí)產(chǎn)權(quán)均歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。否則，承擔(dān)相應(yīng)法律責(zé)任。 ，·j ≥”：i ≯、、／ ≤≯衛(wèi)一7 ’一I ? 一+研究

2、生躲塒導(dǎo)師擗爺二級(jí)學(xué)麓I j j | 。，l 硒年> 月刁日I7 ～f河北醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝等內(nèi)容外，文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，指導(dǎo)教師對(duì)此進(jìn)行了審定。本論文由本人獨(dú)立撰寫，文責(zé)自負(fù)。珊雌轢叫 新纛岔7 日 沖，年b 月刁日中文摘要乙型肝炎病毒D N A X 蛋白突變預(yù)測(cè)乙肝相關(guān)性肝細(xì)胞肝癌患者術(shù)后生存率的研究摘 要目的：構(gòu)

3、成乙型肝炎病毒基因組的4 個(gè)讀碼框是重疊開(kāi)放的，各自編碼一種蛋白。其中X 基因重疊包繞啟動(dòng)子與增強(qiáng)子2 ，前核心區(qū)和核心區(qū)域的轉(zhuǎn)錄作用受以上兩個(gè)因子控制。由于乙型肝炎病毒聚合酶的校對(duì)缺陷，導(dǎo)致乙型肝炎病毒D N A 容易發(fā)生突變。H B V 基因型和病毒D N A 載量均和乙肝相關(guān)性肝細(xì)胞肝癌的發(fā)病相關(guān)聯(lián)，除此之外，前S 1 、前S 2 、B C P 和增強(qiáng)子2 區(qū)域的基因突變也參與到乙肝相關(guān)性肝細(xì)胞肝癌的風(fēng)險(xiǎn)的病例對(duì)照研究中。有研究表

4、明這上述區(qū)域中的幾種基因突變與肝細(xì)胞癌的發(fā)展存在相關(guān)性。然而，目前只有少數(shù)針對(duì)乙肝相關(guān)性肝細(xì)胞肝癌患者中上述基因突變的預(yù)后價(jià)值的研究，尤其針對(duì)H B X 基因區(qū)域。通過(guò)測(cè)定肝組織樣本中乙型病毒性肝炎D N A ，Y e h 等人發(fā)現(xiàn)核心啟動(dòng)子組分A 1 7 5 2 T ／1 7 6 4 A 的突變是肝細(xì)胞癌患者術(shù)后預(yù)后的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子。在當(dāng)前的研究中我們通過(guò)利用來(lái)自乙肝相關(guān)性肝細(xì)胞肝癌患者肝癌組織樣本中的乙肝病毒D N A 測(cè)定出乙型肝炎

5、病毒X 的基因序列，并用該序列來(lái)鑒定識(shí)別與術(shù)后生存相關(guān)的基因突變序列。方法：1 研究對(duì)象及隨訪：選取2 0 0 7 ．2 0 0 9 兩年間在河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院肝膽外科行肝癌切除術(shù)的患者，通過(guò)影像學(xué)檢查、組織病理明確診斷為肝細(xì)胞肝癌。采集肝細(xì)胞癌患者術(shù)中切除的肝癌組織標(biāo)本，并準(zhǔn)確記錄所有患者的性別、年齡、腫瘤大小、T N M 分期、C h i l d 分級(jí)等臨床特征。通過(guò)門診復(fù)查、電話等方式隨訪肝癌患者術(shù)后的生存情況，隨訪時(shí)間截止到2

6、 0 1 4 年1 2 月。2 基因組D N A 提取、擴(kuò)增及測(cè)序：用D N A 純化試劑盒提取肝癌組織標(biāo)本的基因組D N A ，鑒定合格后，采用P C R 技術(shù)擴(kuò)增目的片段，設(shè)計(jì)兩對(duì)引物對(duì)目的片段進(jìn)行擴(kuò)增，引物分別為：H B V I F ：5 ' - A T G C G T G G A A C C T T T G T G ．3 ’，H B V l R ：5 ' - T C G G T C G T T G A C A T