抗LRP4抗體對重癥肌無力的誘導(dǎo).pdf

1、目的：采用建立實驗性自身免疫性重癥肌無力（EAMG）模型的方法研究抗低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白4（LRP4）抗體對于神經(jīng)肌肉接頭處（NMJ）結(jié)構(gòu)和功能的破壞作用，以此探究抗LRP4抗體在LRP4型重癥肌無力（LRP4-MG）中的致病機制。
　　方法：實驗選用10只雌性Balb/c小鼠，采用隨機法分為實驗組和對照組。以腹腔注射的方式為小鼠給藥。實驗組鼠注射抗LRP4抗體，對照組鼠同時注射PBS溶液。連續(xù)給藥5天，第6天處死全部小鼠。對

2、腓腸肌取材，制作冰凍切片。采用免疫組化技術(shù)對標(biāo)本進行處理，用羅丹明結(jié)合的ɑ-銀環(huán)蛇毒素和異硫氰酸結(jié)合的二抗為肌肉切片熒光染色，在共聚焦熒光顯微鏡下觀察。使用透射電鏡技術(shù)觀察標(biāo)本的超微結(jié)構(gòu)。
　　結(jié)果：給藥過程中，實驗組有40％的實驗動物出現(xiàn)活力下降，而對照組的Balb/c小鼠的活動能力沒有表現(xiàn)出明顯的變化。全部給藥計劃完成后實驗組小鼠全部死亡，而對照組小鼠全部存活。將冰凍組織切片置于共聚焦熒光顯微鏡下，實驗組可觀察到紅色熒光和綠色

3、熒光。紅色熒光表示ɑ-銀環(huán)蛇毒素和乙酰膽堿受體結(jié)合。綠色熒光表示二抗與一抗結(jié)合。對照組只能觀察到紅色熒光。透射電鏡觀察到正常的突觸結(jié)構(gòu)：突觸前后膜生長的褶皺多而深，突觸前后膜及突觸間隙中囊泡數(shù)量正常，突觸前膜的神經(jīng)末梢分支廣泛分布。實驗組的NMJ結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)簡化與不完整，突觸中的褶皺少而淺甚至消失、突觸囊泡數(shù)量減少，突觸后膜的形態(tài)是不規(guī)則的、不連續(xù)的、模糊不清的，突觸前膜僅有一些蛻化而分散的神經(jīng)末梢分支。
　　結(jié)論：抗LRP4抗體能與