mPGES-1-PGE2-EP1-4通路參與原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元鋁鹽損傷機制研究.pdf

1、目的：
　?。?）觀察mPGES-1-PGE2-EP1-4信號通路在鋁負荷原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元的變化特征；
　?。?）對 EP1-4進行干預(yù)，觀察其對其原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元鋁鹽損傷的影響。
　　方法：
　　（1）SD大鼠原代海馬神經(jīng)元培養(yǎng)至第7天，采用免疫組化鑒定其純度，采用麥芽酚鋁(Al(mal)3)處理原代海馬神經(jīng)元建立鋁負荷原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元模型，建立空白對照組（PBS）、對照組（maltol300

2、μM）和鋁負荷模型組（Al(mal)3100μM），24h后采用MTT法檢測細胞存活率， LDH法檢測細胞LDH漏出率；采用ELISA法測定細胞中PGE2含量，RT-PCR測定mPGES-1、EP1-4的mRNA表達，western blot測定mPGES-1、EP1-4的蛋白表達。
　　（2）建立對照組（maltol300μM）、鋁負荷模型組（Al(mal)3100μM）；在鋁負荷的基礎(chǔ)上建立7個EP受體干預(yù)組，干預(yù)組分別給予E

3、P1、EP2、EP3、EP4激動劑（17-phenyl trinor Prostaglandin E2 ethyl amide、Butaprost、Sulprostone、CAY10598）以及EP1、EP2、EP4拮抗劑（SC-19220、AH6809、L-161982），每個干預(yù)組又分為10、1、0.1、0.01μM組，24后采用MTT法檢測細胞存活率，采用LDH法檢測細胞LDH漏出率。
　?。?）建立對照組（maltol30

4、0μM）、鋁負荷模型組（Al(mal)3100μM）、EP1激動劑干預(yù)組（17-phenyl trinor Prostaglandin E2 ethyl amide10μM+Al(mal)3100μM）、 EP3激動劑干預(yù)組（ Sulprostone10μM+Al(mal)3100μM）、EP2拮抗劑干預(yù)組（AH680910μM+Al(mal)3100μM）、EP4拮抗劑干預(yù)組（L-16198210μM+Al(mal)3100μM），H

5、E染色觀察其形態(tài)學(xué)改變，采用鈣離子試劑盒測定神經(jīng)元胞內(nèi)鈣離子濃度。
　　結(jié)果：
　?。?）相比對照組，空白對照組神經(jīng)元細胞存活率、LDH漏出率無明顯改變；鋁負荷模型組細胞存活率顯著降低，LD H漏出率顯著升高；鋁負荷組神經(jīng)元 PGE2的含量顯著升高，RT-PCR結(jié)果提示 mPGES-1、EP1、EP2、EP4mRNA表達顯著升高，EP3mRNA表達顯著降低；western blot結(jié)果提示 mPGES-1、EP1、EP2蛋白

6、表達顯著升高，EP3蛋白表達顯著降低，EP4蛋白表達未明顯改變。
　?。?）與鋁負荷模型組相比, Sulprostone對鋁負荷原代海馬神經(jīng)元起保護作用且呈濃度依賴性;17-phenyl trinor Prostaglandin E2 ethyl amide、AH6809、L-161982對鋁負荷原代海馬神經(jīng)元起損傷作用且呈濃度依賴性；SC-19220、Butaprost和CAY10598對鋁負荷大鼠原代海馬神經(jīng)元無明顯作用；17