丙二醛對(duì)大鼠原代培養(yǎng)皮層神經(jīng)元和學(xué)習(xí)記憶能力的損傷作用及其機(jī)制.pdf

1、目的：丙二醛（MDA）是多不飽和脂肪酸脂質(zhì)過(guò)氧化的副產(chǎn)物，以往被用作氧化應(yīng)激水平的評(píng)估指標(biāo)，在許多神經(jīng)系統(tǒng)疾病如腦缺血再灌注損傷、AD、PD等中MDA含量均有升高。肌肽是一種生理性二肽，作為內(nèi)源性抗氧化劑，在脊椎動(dòng)物腦內(nèi)濃度可高達(dá)20 mM，最新研究發(fā)現(xiàn)肌肽有清除醛類(lèi)的能力，可逆轉(zhuǎn)這些有毒醛類(lèi)對(duì)細(xì)胞的損傷，并有利于神經(jīng)系統(tǒng)疾病的轉(zhuǎn)歸。因此，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)比較MDA 與H2O2 對(duì)培養(yǎng)大鼠神經(jīng)元損傷作用的差別，以及肌肽對(duì)MDA 誘導(dǎo)培養(yǎng)大鼠皮

2、層神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用，探討MDA 誘導(dǎo)神經(jīng)元損傷作用的機(jī)制。
　　 方法：采用MDA（100 μM）或H2O2（50 μM）處理細(xì)胞24 h 建立細(xì)胞氧化損傷模型，應(yīng)用細(xì)胞增殖抑制實(shí)驗(yàn)（MTT法）評(píng)價(jià)細(xì)胞存活率；Annexin V/PI染色法流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞壞死和凋亡；LDH assay和Hoechst 33258染色分別檢測(cè)神經(jīng)元壞死和凋亡；用DCF-DA染色方法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS 生成及MitoTrack-Red染色輔助線

3、粒體定位；JC-1染色標(biāo)記線粒體膜電位改變；用SDS-PAGE 電泳檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)高分子量聚集物的形成；用Western Blotting 方法檢測(cè)MAPK 信號(hào)通路及相關(guān)凋亡蛋白BaX與Bcl-2的表達(dá)。
　　 結(jié)果：MDA 時(shí)間和劑量依賴性地降低培養(yǎng)大鼠皮層神經(jīng)元的存活率，細(xì)胞凋亡和壞死均參與其中；MDA 使細(xì)胞內(nèi)ROS大量生成，同時(shí)伴隨線粒體功能失常，表現(xiàn)為線粒體膜電位（ψm ⊿）的下降；細(xì)胞內(nèi)JNK 激活而ERK 失活。與普

4、通抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸（NAC）相比，肌肽對(duì)MDA 細(xì)胞損傷的保護(hù)作用更好，它不僅能逆轉(zhuǎn)ψm ⊿的下降、ROS 生成和MAPK表達(dá)改變，而且還能抑制MDA 導(dǎo)致的蛋白質(zhì)交聯(lián)。
　　 結(jié)論：MDA以蛋白交聯(lián)/線粒體功能失調(diào)/ROS大量生成/MAPK 通路損傷神經(jīng)元，肌肽能夠完全阻斷此通路從而發(fā)揮神經(jīng)元保護(hù)作用而NAC 則僅可抑制Bcl-2 家族相關(guān)MAPK的活性，故其保護(hù)作用不及肌肽。與其他傳統(tǒng)抗氧化劑相比，肌肽優(yōu)先去除MDA

5、蛋白交聯(lián)毒性進(jìn)而更好保護(hù)MDA 神經(jīng)元損傷的能力，提示它是神經(jīng)系統(tǒng)疾病治療的一個(gè)潛在開(kāi)發(fā)藥物。
　　 目的：不同種類(lèi)和濃度的ROS 對(duì)LTP 有不同的調(diào)控作用，MDA 作為ROS 脂質(zhì)過(guò)氧化下游產(chǎn)物，其本身對(duì)于大鼠學(xué)習(xí)記憶能力以及海馬LTP的影響尚無(wú)研究。因此，本研究旨在觀察MDA對(duì)大鼠空間學(xué)習(xí)能力及海馬DG區(qū)LTP的影響及其可能的機(jī)制。
　　 方法：Morris 水迷宮用來(lái)評(píng)價(jià)海馬相關(guān)空間工作學(xué)習(xí)記憶能力，海馬PP-D

6、G 通路在體場(chǎng)電位LTP 記錄來(lái)檢測(cè)MDA 對(duì)LTP的影響及相關(guān)影響因素，免疫組化及WesternBlotting 結(jié)合探討MDA 損傷學(xué)習(xí)記憶過(guò)程中相關(guān)分子機(jī)制的參與。
　　 結(jié)果：（1）1，10，100 mM MDA 可劑量依賴性地?fù)p傷海馬相關(guān)空間學(xué)習(xí)記憶能力，Morris 水迷宮實(shí)驗(yàn)表明MDA 預(yù)處理大鼠在目標(biāo)象限停留時(shí)間較對(duì)照組明顯減少，并且趨向于在外環(huán)區(qū)域活動(dòng)。（2）MDA 劑量依賴性地?fù)p傷大鼠海馬PP-DG 通路LT

7、P的誘導(dǎo)，10和100 mMMDA 可引起LTP 誘導(dǎo)幅值的明顯降低。（3）HFS 誘導(dǎo)的LTP 需要NMDA 受體的激活及[Ca2+]I的增加，MDA 抑制LTP 主要是通過(guò)抑制NMDA 受體的功能實(shí)現(xiàn)的。（4）MDA主要通過(guò)抑制突觸后PKA和PKC/CaMKⅡ/MAPK 信號(hào)通路分子活性而發(fā)揮抑制LTP的作用。（5）MDA 導(dǎo)致的海馬細(xì)胞凋亡可能也參與了其導(dǎo)致的海馬相關(guān)空間學(xué)習(xí)記憶能力受損和LTP 損傷。
　　 結(jié)論：MDA