芪參還五膠囊對(duì)大鼠卡壓性坐骨神經(jīng)損傷作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:本課題擬通過以芪參還五膠囊藥物灌胃在大鼠坐骨神經(jīng)卡壓損傷模型的應(yīng)用，通過觀察光鏡下卡壓坐骨神經(jīng)組織結(jié)構(gòu)的改變、腓腸肌運(yùn)動(dòng)終板的染色及形態(tài)改變;電鏡下腓腸肌運(yùn)動(dòng)終板的改變、坐骨神經(jīng)切片的超微結(jié)構(gòu)改變，比較實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組神經(jīng)退變及修復(fù)再生的差異，以期明確芪參還五膠囊促進(jìn)周圍神經(jīng)修復(fù)再生的作用和效應(yīng)部位及時(shí)間窗，為中西醫(yī)結(jié)合治療周圍神經(jīng)卡壓性疾患提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:選擇雄性Sprague-Dawley大鼠48只，體重2

2、30g±20g，清潔級(jí)。坐骨神經(jīng)鉗夾法制作大鼠實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?以1.5％戊巴比妥鈉(0.2ml/100g)作腹腔注射麻醉，麻醉成功后常規(guī)備皮、消毒、鋪巾，于右臀肌間隙分離坐骨神經(jīng)，梨狀肌下緣0.8cm處用大止血鉗鉗夾坐骨神經(jīng)，壓滿3扣，擠壓5秒后松開10秒，反復(fù)3次，關(guān)閉切口。造模后按隨機(jī)數(shù)字表法平均分為實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組，每組24只，分籠喂養(yǎng)。造模后第2日開始喂藥，實(shí)驗(yàn)組:給予芪參還五膠囊藥末鹽水溶液灌胃，3g生藥/ml，1ml/100g體重，

3、1次/日;對(duì)照組:給予生理鹽水1ml/100g體重灌胃，1次/日。術(shù)后1、2、4、8周末實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組隨機(jī)各取6只進(jìn)行比較。研究?jī)?nèi)容:1實(shí)驗(yàn)大鼠整體及標(biāo)本大體觀察;2光鏡觀察:1）卡壓坐骨神經(jīng)光鏡下觀察:有髓纖維增生情況、髓鞘改變、軸索、血管再生情況。2）腓腸肌運(yùn)動(dòng)終板光鏡觀察:腓腸肌形態(tài)的改變;運(yùn)動(dòng)終板染色情況及結(jié)構(gòu)改變。3電鏡觀察:1）卡壓坐骨神經(jīng)標(biāo)本電鏡觀察:觀察神經(jīng)髓鞘、軸索、雪旺氏細(xì)胞、線粒體、微管等超微結(jié)構(gòu)的變化。2）腓腸肌

4、電鏡觀察:不同時(shí)間段對(duì)運(yùn)動(dòng)終板處肌節(jié)，軸突，雪旺氏細(xì)胞，初級(jí)皺褶，次級(jí)皺褶，突觸小泡的改變的影響。
　　結(jié)果:
　　1動(dòng)物整體觀察造模后大鼠飲食正常，跛行，行走拖步，切口愈合良好，無紅腫、潰瘍及感染，無自噬現(xiàn)象。造模后1周右后肢蜷縮，2周小腿肌肉出現(xiàn)不同程度的萎縮，患肢功能受限。從恢復(fù)情況來看，2周內(nèi)兩組未見明顯差異，2周后，實(shí)驗(yàn)組優(yōu)于對(duì)照組。4周后隨時(shí)間的延長(zhǎng)，步態(tài)和肌肉逐漸恢復(fù)正常。
　　2大體觀察造模后1、2周實(shí)

5、驗(yàn)組和對(duì)照組兩組損傷段坐骨神經(jīng)改變無明顯差異，卡壓處均出現(xiàn)神經(jīng)充血、水腫，卡壓處變細(xì)，卡壓遠(yuǎn)端可見神經(jīng)瘤樣改變。損傷神經(jīng)支配之腓腸肌萎縮。4周時(shí)實(shí)驗(yàn)組卡壓神經(jīng)充血水腫已不明顯，卡壓神經(jīng)增粗，腓腸肌增粗;對(duì)照組卡壓神經(jīng)充血、水腫較前減輕，減輕程度次于實(shí)驗(yàn)組改變，腓腸肌增粗不明顯。8周時(shí)兩組卡壓神經(jīng)充血、水腫均消失，兩組卡壓處神經(jīng)均明顯增粗，接近于正常。
　　3光鏡觀察
　　3.1卡壓遠(yuǎn)端神經(jīng)造模后1、2周內(nèi)兩組改變無明顯差異，

6、神經(jīng)周圍出現(xiàn)大量的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，有髓纖維數(shù)少，髓鞘厚薄不均，髓鞘脫失明顯，束間結(jié)締組織明顯，血管較少。4周時(shí)實(shí)驗(yàn)組有髓纖維數(shù)明顯增多，粗大纖維數(shù)目比例增加，髓鞘明顯增厚，髓鞘解體少，未見卵圓體形成，束間結(jié)締組織明顯減少，血管增生明顯，血運(yùn)豐富。對(duì)照組有髓纖維數(shù)增多，但以細(xì)小有髓纖維為主，髓鞘較薄，髓鞘解體明顯，可見卵圓體形成，束間結(jié)締組織較多，有血管增生。8周時(shí)實(shí)驗(yàn)組有髓纖維數(shù)增多顯著，粗大纖維數(shù)比例明顯增加，髓鞘增厚，軸索外觀完整，束

7、間未見明顯的結(jié)締組織增生，神經(jīng)纖維間血管壁薄，內(nèi)生細(xì)胞無腫脹，管腔通暢，血運(yùn)豐富，神經(jīng)纖維逐漸發(fā)育成熟。對(duì)照組有髓纖維數(shù)出現(xiàn)明顯增多，但粗大纖維比例增加不明顯，髓鞘較前增厚，束間結(jié)締組織減少，神經(jīng)纖維間血管壁厚，內(nèi)皮細(xì)胞腫脹。
　　3.2腓腸肌運(yùn)動(dòng)終板(MEP)改變情況造模后1周實(shí)驗(yàn)組MEP染色呈棕褐色，橢圓形，色澤稍淡，終板邊緣肌細(xì)胞水腫。對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組相似。2周時(shí)實(shí)驗(yàn)組MEP染色變淺，不均勻，形態(tài)不一;對(duì)照組部分出現(xiàn)染色空白區(qū)

8、，終板數(shù)稀少。4周時(shí)實(shí)驗(yàn)組MEP大體形態(tài)存在，光鏡下可辨認(rèn)，數(shù)量進(jìn)一步減少;對(duì)照組MEP形態(tài)分辨不清，數(shù)量稀少。8周時(shí)，兩組MEP大體形態(tài)接近正常，染色均勻，兩組改變無明顯差異。
　　4電鏡觀察
　　4.1卡壓處神經(jīng)電鏡觀察造模后1周時(shí)實(shí)驗(yàn)組髓鞘嚴(yán)重變形，板層結(jié)構(gòu)排列紊亂，髓索變窄，索內(nèi)線粒體消失，可見少量微絲。對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組相似。2周時(shí)實(shí)驗(yàn)組髓鞘較前增厚，可見線粒體、微絲、微管，但數(shù)目較少，排列稀疏。對(duì)照組髓鞘腫脹，線粒體

9、空化壞死，崩解。4周時(shí)實(shí)驗(yàn)組髓鞘增生明顯，排列不規(guī)律，可見到線粒體。對(duì)照組髓鞘變厚變形，軸索變窄，線粒體消失，可見少量微絲。8周時(shí)實(shí)驗(yàn)組再生有髓神經(jīng)纖維增多，髓鞘增厚排列規(guī)則，板層結(jié)構(gòu)清晰，可見線粒體、微絲較前增多，雪旺氏細(xì)胞少。對(duì)照組髓鞘顯著增厚，不規(guī)則，線粒體、微絲較少，未見雪旺氏細(xì)胞。
　　4.2腓腸肌運(yùn)動(dòng)終板電鏡觀察造模后1周時(shí)突觸間隙變寬，初級(jí)皺褶和次級(jí)皺褶變淺，線粒體腫脹，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組改變無明顯差異。2周時(shí)實(shí)驗(yàn)組ME

10、P萎縮，終板突觸后區(qū)域變寬，初級(jí)皺褶和次級(jí)皺褶變淺，突觸間隙變寬，線粒體腫脹，無空泡變性;對(duì)照組MEP改變明顯，初級(jí)皺褶和次級(jí)皺褶扭曲，線粒體空泡變性。4周時(shí)實(shí)驗(yàn)組MEP萎縮，初級(jí)皺褶和次級(jí)皺褶扭曲導(dǎo)致次級(jí)突觸間隙變寬，線粒體空泡變性;對(duì)照組MEP突觸后區(qū)域簡(jiǎn)單化，次級(jí)皺褶局部消失，突觸間隙繼續(xù)增寬。8周時(shí)實(shí)驗(yàn)組終板突觸間隙正常，初級(jí)皺褶和次級(jí)皺褶較為清晰，可以分辨。對(duì)照組接近于實(shí)驗(yàn)組。
　　結(jié)論:芪參還五膠囊在一定時(shí)限內(nèi)有延緩肌