胃癌細(xì)胞高活性乙醛脫氫酶亞型分析及其在胃癌組織表達(dá)規(guī)律.pdf

1、腫瘤是一個(gè)具備明顯異質(zhì)性的群體，腫瘤干細(xì)胞(cancer stem cells，CSCs)作為其中的關(guān)鍵亞群在腫瘤發(fā)生、進(jìn)展、治療抵抗、復(fù)發(fā)等方面起到重要作用。其中，乙醛脫氫酶(Aldehyde dehydrogenase，ALDH)活性是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的CSC標(biāo)志物，ALDH參與調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化等多個(gè)重要過(guò)程，并逐漸作為干性相關(guān)指標(biāo)判斷腫瘤患者生存預(yù)后。ALDH家族包括19種亞型，各亞型表達(dá)呈現(xiàn)明顯的腫瘤特異性及組織特異性。在胃癌方面

2、，有報(bào)道ALDH+胃癌細(xì)胞具備一定的干細(xì)胞特性，然而尚沒(méi)有關(guān)于胃癌中高活性ALDH亞型的研究。因此針對(duì)胃癌細(xì)胞中高活性ALDH家族亞型的分析對(duì)于探究其在CSC發(fā)生中的調(diào)節(jié)機(jī)制以及選擇預(yù)后指標(biāo)方面具有重要意義。
　　本研究擬對(duì)胃癌細(xì)胞中高活性乙醛脫氫酶亞型進(jìn)行分析并在組織層面分析其表達(dá)規(guī)律。
　　研究方法:
　　1、ALDH+亞群干細(xì)胞特性鑒定。
　　1)采用AldeFluor染色及流式分選方法在MKN-45及SG

3、C-7901胃癌細(xì)胞株中對(duì)ALDH+以及ALDH-亞群進(jìn)行分選，并通過(guò)通過(guò)無(wú)血清成球培養(yǎng)法進(jìn)行擴(kuò)增。
　　2)實(shí)時(shí)定量PCR及WesternBlot方法檢測(cè)ALDH+亞群細(xì)胞干性相關(guān)基因Bmi-1、Sox-2、Oct-4表達(dá);
　　3)成球培養(yǎng)法驗(yàn)證ALDH+細(xì)胞自我更新能力;
　　4)采用血清培養(yǎng)法驗(yàn)證ALDH+細(xì)胞是否可發(fā)生分化;
　　5)皮下移植瘤實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證ALDH+細(xì)胞是否具備高成瘤能力。
　　2、A

4、LDH+亞群高表達(dá)ALDH3A1。
　　1)采用實(shí)時(shí)定量PCR法分析該亞群中19種ALDH家族成員表達(dá);
　　2)采用si-RNA干擾ALDH3A1表達(dá)驗(yàn)證ALDH+亞群比例是否改變;
　　3、ALDH3A1表達(dá)與胃癌組織分化程度相關(guān)。
　　收集胃癌組織，采用免疫組化染色分析其高表達(dá)成員ALDH3A1在胃癌組織中的表達(dá)規(guī)律。
　　研究結(jié)果:
　　1、ALDH+亞群高表達(dá)干性相關(guān)基因，并具備自我更新、多

5、向分化及高成瘤能力。
　　1) MKN-45及SGC-7901胃癌細(xì)胞株中含較高比例ALDH+亞群，該亞群可通過(guò)無(wú)血清成球培養(yǎng)法進(jìn)行擴(kuò)增。
　　2)實(shí)時(shí)定量PCR及WesternBlot方法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)ALDH+亞群細(xì)胞高表達(dá)干性相關(guān)基因Bmi-1、Sox-2、Oct-4;
　　3) ALDH+細(xì)胞可以成球培養(yǎng)并連續(xù)傳代;
　　4) ALDH+細(xì)胞置于10％FBS培養(yǎng)基中培養(yǎng)后其干性標(biāo)志CD44表達(dá)下降;
　　

6、5)移植瘤實(shí)驗(yàn)方面，相同數(shù)量級(jí)的細(xì)胞ALDH+細(xì)胞較ALDH-細(xì)胞具備更強(qiáng)的成瘤能力。
　　2、ALDH+亞群高表達(dá)ALDH3A1。
　　1)實(shí)時(shí)定量PCR法分析該亞群中19種ALDH家族成員表達(dá)，結(jié)果顯示ALDH3A1、ALDH2、ALDH16A1以及ALDH18A1等多個(gè)成員表達(dá)升高，其中ALDH3A1表達(dá)升高最明顯。
　　2)進(jìn)一步采用si-RNA干擾ALDH3A1表達(dá)后，ALDH+亞群比例下降。
　　3、