水通道蛋白-3在食管鱗癌區(qū)域癌化中的表達(dá)及臨床相關(guān)研究.pdf

1、食管癌（Esophageal carcinoma，EC）是一種最常見的消化道惡性腫瘤，位居全世界癌癥發(fā)病率第四位。在中國食管癌已經(jīng)成為主要的消化道腫瘤死因之一。現(xiàn)階段尚不清楚食管癌的確切病因，臨床上大多數(shù)食管癌患者就診時已處于中晚期，近年來隨著外科診療水平的提高其術(shù)后5年生存率僅僅為25％左右。然而，早期食管癌術(shù)后5年生存率可達(dá)90%以上。為此探討針對食管癌的早期致病機制，已經(jīng)成為臨床食管癌主要的研究方向之一。目前為止，食管癌致病機制的

2、臨床和基礎(chǔ)研究仍無突破。隨著分子生物學(xué)技術(shù)研究的提高，已經(jīng)證實在頭頸部鱗癌、肺癌、口腔癌、結(jié)腸癌中包括食管鱗癌在內(nèi)的多種上皮來源性的腫瘤中都有可能存在“區(qū)域癌化”等早期癌變現(xiàn)象。水通道蛋白-3(AQP-3，aquaporin-3)作為水通道蛋白家族中一重要亞型，具有該蛋白家族基因的共同特性，研究發(fā)現(xiàn)AQP3曾作為致癌基因在食管癌的分化增殖和侵襲轉(zhuǎn)移中起著重要的作用。目前對于食管鱗癌的研究國內(nèi)很少見從“區(qū)域癌化”理論角度來探討食管癌早期發(fā)

3、病機制，尤其缺乏對食管鱗癌區(qū)域癌化內(nèi)水通道蛋白-3(AQP3)表達(dá)異常的系統(tǒng)性認(rèn)識及相關(guān)臨床研究。近年研究結(jié)果顯示，AQP3在多種不同惡性腫瘤內(nèi)表達(dá)水平與腫瘤的增殖分化、遠(yuǎn)處侵襲轉(zhuǎn)移及生存預(yù)后存在相關(guān)性。依據(jù)現(xiàn)有文獻報道，在食管鱗癌不同組織區(qū)域中存在AQP3表達(dá)差異，其中AQP3表達(dá)含量與食管鱗癌的臨床預(yù)后具有相關(guān)性。本研究采用Lugol's染色及HE化學(xué)染色法初步篩選出食管鱗癌中具有“區(qū)域癌化組織”的標(biāo)本，通過Real-Time PC

4、R實時熒光定量和Western-blot蛋白質(zhì)免疫印跡技術(shù)從基因和蛋白質(zhì)水平驗證AQP3基因在食管正常組織、區(qū)域癌化及配對鱗癌組織中的表達(dá)差異，并分析其與相關(guān)影響因素之間的關(guān)系；結(jié)合術(shù)后隨訪系統(tǒng)評估食管鱗癌患者AQP3表達(dá)水平及相關(guān)臨床預(yù)后因素對生存時間的影響；最后從基因、蛋白質(zhì)組學(xué)方面為食管鱗癌的早期發(fā)病機制提供新的思路。
　　目的：依據(jù)食管鱗癌“區(qū)域癌化”理論基礎(chǔ)，用Lugol's染色及HE化學(xué)染色法初步篩選出食管鱗癌中“區(qū)域

5、癌化組織”即Lugol's液染色陽性病理表型正常的食管粘膜組織。利用Real-TimePCR實時熒光定量和Western-blot蛋白質(zhì)免疫印跡技術(shù)驗證水通道蛋白-3（AQP3）在食管正常上皮、區(qū)域癌化及食管鱗癌三種不同組織中的表達(dá)，并結(jié)合臨床相關(guān)預(yù)后因素探討AQP3表達(dá)與食管鱗癌生存時間的關(guān)系，初步了解AQP3基因在食管鱗癌癌變過程中的作用。
　　方法：（1）回顧性分析2005年1月至2015年12月間甘肅省人民醫(yī)院及甘肅省腫瘤

6、醫(yī)院胸外科食管鱗癌手術(shù)標(biāo)本共102例。所有收集的標(biāo)本均行食管粘膜Lugos’s液染色，初步篩選出65例患者存在“區(qū)域癌化”組織；（2）將65例符合納入標(biāo)準(zhǔn)的標(biāo)本分別采用Real-Time PCR和Western-blot從基因及蛋白層面檢測水通道蛋白-3（AQP3）在65例食管鱗癌區(qū)域癌化組織中的表達(dá)情況。（3）依據(jù)病歷查詢系統(tǒng)及生存期回訪系統(tǒng)回顧性收集65例患者臨床相關(guān)信息。采用 Kaplan-Meier生存曲線分析比較各相關(guān)獨立因素

7、生存期；采用Log-Rank檢驗比較各組間生存時間差異；Cox回歸模型分析判斷影響食管鱗癌預(yù)后的獨立因素，以α=0.05為差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.Lugol's染色及HE化學(xué)染色法初步篩選出食管鱗癌田野癌化區(qū)域。
　　證實了碘染色異常但病理表型正常的食管上皮符合區(qū)域癌化的條件，是食管鱗癌的早期病變。
　　2.AQP3mRNA、蛋白表達(dá)水平與食管鱗癌的關(guān)系。
　　AQP3mRNA、蛋白表達(dá)

8、在三種不同食管組織中存在顯著的統(tǒng)計學(xué)差異，其表達(dá)含量依次升高（P<0.05）。男性、家族史、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、高中分化、浸潤深度、腫瘤大小，與AQP3mRNA陽高性表達(dá)率相關(guān)，且AQP3表達(dá)蛋白的變化趨勢與AQP3基因表達(dá)具有一致性。
　　3.生存分析
　　Kaplan-Meier生存分析顯示：食管鱗癌生存期與性別、家族史、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度、分化程度、腫瘤病理形態(tài)、AQP3mRNA及蛋白表達(dá)等單因素相關(guān)。Cox風(fēng)險回歸模型顯示