貓干擾素FeIFN-ω和FeIFN-α的克隆、表達和體外生物學(xué)活性研究.pdf

1、貓干擾素omega(FeIFN-ω)屬Ⅰ型干擾素，具有抗病毒，抗增殖和免疫調(diào)節(jié)功能。干擾素的生物學(xué)活性具有種屬限制性，但也有報道，人IFN-ω對其他種屬也有作用，而且較之IFN-α具有更為廣譜的生物學(xué)活性和更高的抗病毒能力。干擾素的研究已有幾十年的歷史，但對貓源干擾素的研究，目前國內(nèi)尚未見報道。 1.本試驗從感染貓傳染性腹膜炎病毒(FIPV)的普通緬甸貓脾臟中克隆貓ω型干擾素基因(FeIFN-ω)；以實驗室保存的含貓α型干擾素

2、基因(FeIFN-α)的質(zhì)粒Pet-28a/FeIFN-α為模板，PCR擴增FeIFN-α成熟區(qū)域。利用分子生物學(xué)技術(shù)，分別構(gòu)建原核表達載體pET-His/FeIFN-ω和pET-His/FeIFN-α，轉(zhuǎn)化大腸桿菌Rosetta(DE3)，得到高效穩(wěn)定的包涵體表達。通過包涵體洗滌和Ni-NTA親和層析兩步純化，蛋白純度能達到95％以上。 2.本研究采用以細胞致病效應(yīng)(CPE)抑制為基礎(chǔ)的抑制微量測定法，根據(jù)結(jié)晶紫染色，利用酶

3、標(biāo)儀測定干擾素的抗病毒活性結(jié)果。試驗從兩個方面比較了干擾素FeIFN-ω、FeIFN-α的體外生物學(xué)活性，同時以日本干擾素產(chǎn)品Intercat()作為參照。第一，從干擾素廣譜抗病毒活性方面，比較了三種干擾素亞型抵抗四種不同種屬病毒的活性；第二，從干擾素生物學(xué)活性的種屬限制性方面，比較了三種干擾素亞型在五種不同種屬細胞上，抵抗水泡性口炎病毒的活性。結(jié)果顯示，第一，重組貓ω型干擾素(FeIFN-ω)抵抗四種病毒的活性明顯高于重組貓α型干擾素

4、(FeIFN-α)，尤其對H9N2亞型禽流感病毒(AIV)，F(xiàn)eIFN-ω的活性是FeIFN-α的160倍，對犬瘟熱病毒(CDV)，F(xiàn)eIFN-ω的活性是FeIFN-α的4倍，而日本同類產(chǎn)品Intercat()對CDV和AIV均未表現(xiàn)活性。第二，F(xiàn)eIFN-ω在五種不同種屬的細胞上均顯示高效的抗病毒活性，在非洲綠猿猴腎細胞(VERO)和牛腎細胞(MDBK)上，F(xiàn)eIFN-ω抗VSV的活性能達到0.13×106U/mg，是FeIFN-α活