欖香烯對(duì)HER2高表達(dá)乳腺癌的抑制作用與機(jī)制.pdf

1、目的:乳腺癌在女性惡性腫瘤中已成為最常見(jiàn)的一種,近年來(lái),乳腺癌的發(fā)病率在逐年上升,并且呈現(xiàn)出年輕化的趨勢(shì),而易轉(zhuǎn)移和高復(fù)發(fā)以及耐藥性的特點(diǎn)使其成為臨床治療的難點(diǎn)。目前,依據(jù)分子標(biāo)志物的不同將乳腺癌主要分為四種亞型:luminalA、luminalB、Her-2、basal-like型。其中,在乳腺癌患者中Her-2亞型占有20％～30％,而且這種類型的乳腺癌更易復(fù)發(fā)且預(yù)后不良。隨著對(duì)乳腺癌的深入研究,發(fā)現(xiàn)乳腺癌中存在著少量的腫瘤干細(xì)胞,

2、并且認(rèn)為乳腺癌干細(xì)胞是其耐藥性的產(chǎn)生、腫瘤的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的重要原因之一。研究報(bào)道稱放療可以誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞成為乳腺癌干細(xì)胞,化療藥物的使用也可以使乳腺癌干細(xì)胞富集,從而產(chǎn)生耐藥性。在對(duì)乳腺癌細(xì)胞與乳腺癌干細(xì)胞二者相互關(guān)系的探索中發(fā)現(xiàn)HER2基因過(guò)表達(dá)可以引起乳腺癌干細(xì)胞的增殖,并且與乳腺癌干細(xì)胞標(biāo)志物乙醛脫氫酶1(ALDHI)的表達(dá)成正相關(guān)。另有報(bào)道稱在MCF-7細(xì)胞中HER2過(guò)表達(dá)時(shí),乳腺癌干細(xì)胞數(shù)量的增加高達(dá)4～5倍。因此對(duì)于HER2高

3、表達(dá)的乳腺癌產(chǎn)生的耐藥性以及轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā),認(rèn)為與其干性特征密切相關(guān)。欖香烯是一種廣譜的抗腫瘤中藥,對(duì)多種腫瘤細(xì)胞有效,如惡性膠質(zhì)瘤、白血病細(xì)胞、卵巢癌、胃癌以及乳腺癌,其抗腫瘤機(jī)制主要有誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡、阻滯細(xì)胞的周期、抑制腫瘤細(xì)胞的遷移、侵襲,并且欖香烯還具有逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞的耐藥性和對(duì)放射增敏的作用。研究發(fā)現(xiàn)欖香烯能夠抑制Notch-1蛋白從而在胃癌干細(xì)胞樣細(xì)胞中降低其血管形成能力。隨后有報(bào)道稱欖香烯可以抑制膠質(zhì)瘤干細(xì)胞樣細(xì)胞的多能性分

4、化,并且逆轉(zhuǎn)對(duì)替莫唑胺化療藥物的抵抗性,而對(duì)其機(jī)制的研究仍未明確。在欖香烯對(duì)乳腺癌細(xì)胞的研究中也發(fā)現(xiàn)欖香烯可以促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的凋亡并具有化療增敏的作用,但對(duì)其機(jī)制的研究目前甚少。因此,為了觀察欖香烯對(duì)乳腺癌細(xì)胞的增殖抑制作用,并且檢測(cè)其對(duì)HER2高表達(dá)的乳腺癌細(xì)胞是否有效,我們通過(guò)對(duì)MCF-7細(xì)胞系與HER2高表達(dá)的細(xì)胞系MCF-7 HER2進(jìn)行欖香烯藥物的實(shí)驗(yàn),觀察其對(duì)乳腺癌細(xì)胞的遷移能力的影響,并且探討欖香烯對(duì)乳腺癌細(xì)胞的干性相關(guān)因

5、子的作用,研究在乳腺癌干細(xì)胞方面欖香烯對(duì)其產(chǎn)生的作用與影響。
　　方法:(1)用MTT法檢測(cè)欖香烯對(duì)乳腺癌細(xì)胞MCF-7與HER2高表達(dá)的MCF-7HER2細(xì)胞的增殖抑制作用,并且經(jīng)過(guò)克隆形成實(shí)驗(yàn)再次驗(yàn)證欖香烯對(duì)其生長(zhǎng)的抑制作用。(2)應(yīng)用劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)欖香烯在乳腺癌細(xì)胞遷移能力方面的影響,并且應(yīng)用梯度濃度的欖香烯藥物觀察其對(duì)乳腺癌細(xì)胞遷移能力的抑制作用。(3)通過(guò)免疫印跡方法驗(yàn)證MCF-7 HER2細(xì)胞在蛋白水平高表達(dá)HER2,同

6、時(shí)檢測(cè)MCF-7HER2細(xì)胞腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物CD44蛋白與CD24蛋白的表達(dá),最后檢測(cè)欖香烯作用于兩種乳腺癌細(xì)胞后其腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物的表達(dá)水平的變化以及干性相關(guān)因子蛋白水平的變化。(4)成球?qū)嶒?yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證MCF-7 HER2與MCF-7細(xì)胞在欖香烯藥物作用下腫瘤干性能力的變化。
　　結(jié)果:(1)MTT檢測(cè)欖香烯對(duì)乳腺癌細(xì)胞MCF-7與MCF-7 HER2具有顯著的抑制作用,并且隨著時(shí)間和藥物濃度的增高對(duì)乳腺癌細(xì)胞的增殖抑制作用越強(qiáng)

7、?？寺⌒纬蓪?shí)驗(yàn)也驗(yàn)證了欖香烯對(duì)乳腺癌單個(gè)細(xì)胞的抑制作用。(2)通過(guò)劃痕實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)欖香烯對(duì)乳腺癌細(xì)胞的遷移能力具有抑制作用,并呈劑量依賴關(guān)系。(3)免疫印跡方法結(jié)果顯示,MCF-7 HER2在CD44蛋白、ALDH1蛋白水平的表達(dá)顯著高于MCF-7,而CD24則低,說(shuō)明MCF-7 HER2具有腫瘤干細(xì)胞的特性,經(jīng)欖香烯藥物處理兩種細(xì)胞后發(fā)現(xiàn),CD44、ALDH1明顯降低而CD24升高,并且腫瘤干性相關(guān)因子Oct4、Nanog、Sox2、KL

8、F4、c-Myc、LIN28A的表達(dá)水平也明顯下調(diào)。(4)應(yīng)用成球?qū)嶒?yàn)進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)MCF-7 HER2的成球能力也明顯高于MCF-7,在欖香烯藥物作用后兩種細(xì)胞的成球體積與數(shù)目明顯下降。
　　結(jié)論:本文通過(guò)細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)欖香烯顯著抑制MCF-7細(xì)胞與MCF-7 HER2細(xì)胞的增殖能力,并且降低細(xì)胞的遷移活動(dòng)能力,通過(guò)免疫印跡,表明MCF-7 HER2具有腫瘤干細(xì)胞的特性,并且在經(jīng)過(guò)欖香烯藥物處理后其干性表達(dá)明顯下降,證明欖香烯對(duì)H