mTOR與GDM胎鼠肺發(fā)育關(guān)系的研究.pdf

1、妊娠期糖尿?。℅eastational diabetes mellitus,GDM）指在懷孕期間發(fā)生或首次診斷為不同程度的糖耐量受損（糖尿病合并妊娠除外）。孕婦的體內(nèi)糖代謝平衡失調(diào)，進(jìn)而使得胎兒暴露于宮內(nèi)的高糖及高胰島素環(huán)境中，影響著胎兒各器官發(fā)育尤其是肺發(fā)育。臨床GDM的危害很多，如可出現(xiàn)胎兒羊水過多、母體易發(fā)生糖尿病酮癥酸中毒；或引起巨大胎兒或FGR，流產(chǎn)、早產(chǎn)、胎兒畸形；新生兒呼吸窘迫綜合征（respiratory distres

2、s syndrome,RDS）及新生兒低血糖等。其中RDS是GDM胎肺成熟障礙直接表現(xiàn)，胎肺發(fā)育延遲，肺Ⅱ型上皮合成分泌表面活性蛋白合成及分泌減少，繼而PS功能受阻，在呼吸過程中不能有效的降低肺表面張力，新生兒出現(xiàn)呼吸窘迫，當(dāng)不能及時(shí)給予治療時(shí)，就會(huì)使得新生兒出現(xiàn)RDS。而GDM胎鼠肺表面活性蛋白表達(dá)下降的分子調(diào)控機(jī)制尚不明確。
　　mTOR，mammalian target of Rapamycin，又叫雷帕霉素靶蛋白，是絲氨酸

3、/蘇氨酸蛋白激酶，參與細(xì)胞內(nèi)多種生理活動(dòng)，可以接受并整合細(xì)胞內(nèi)外的各種刺激，如高糖及高胰島素均可以促使其磷酸化激活（p-mTOR）（注：本實(shí)驗(yàn)中所涉及到的mTOR所有的磷酸化位點(diǎn)均指其ser2448位點(diǎn)），引起其下游調(diào)控因子的改變。生理狀態(tài)下，孕晚期胎肺組織中p-mTOR表達(dá)量很低，當(dāng)mTOR處于過度磷酸化激活則抑制表面活性蛋白的生成。此外，mTOR還能協(xié)調(diào)肺部接氣管與血管的發(fā)育。
　　因此，本實(shí)驗(yàn)在于探索p-mTOR在GDM胎肺

4、組織中的表達(dá)，是否參與妊娠期糖尿病胎肺成熟障礙過程，及其具體機(jī)制。揭示在妊娠糖尿病胎肺發(fā)育中mTOR的作用，為胎肺成熟障礙的治療提供新的治療方向。
　　目的：
　　探索mTOR是否參與GDM胎鼠肺發(fā)育過程及其可能作用機(jī)制。
　　方法：
　　1.將SPF級(jí)妊娠SD大鼠30只隨機(jī)分成實(shí)驗(yàn)組（即糖尿病組），干預(yù)組（糖尿病模型基礎(chǔ)上，給予雷帕霉素干預(yù)）及對(duì)照組（檸檬酸緩沖液）；
　　2.ELISA測定胎血清中胰島素

5、的含量及羊水中SP-B及SP-C水平；
　　3.應(yīng)用光鏡設(shè)備觀察各組胎肺組織的大體形態(tài)結(jié)構(gòu)；
　　3.免疫組化及免疫熒光技術(shù)檢測各組胎肺組織中的p-mTOR、SP-B、SP-C表達(dá)水平；
　　4.Western Blot檢測胎肺組織中的mTOR、P-mTOR、SP-B、SP-C蛋白表達(dá)水平。
　　5.RT-PCR技術(shù)檢測胎鼠肺組織中的SP-B、SP-C的mRNAs表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1.成功構(gòu)

6、建妊娠期糖尿病孕鼠20只；
　　2.應(yīng)用mTOR特異性抑制劑后，干預(yù)組胎肺中p-mTOR的表達(dá)明顯較糖尿病組降低，干預(yù)成功；
　　3.糖尿病組及干預(yù)組各流產(chǎn)2只，糖尿病組成功取材孕鼠8只，干預(yù)組成功取材孕鼠8只，對(duì)照組成功取材孕鼠10只；
　　4.糖尿病組及干預(yù)組的胎鼠血糖值及血清胰島素值水平均較正常組高；
　　5.與對(duì)照組相比，糖尿病組p-mTOR蛋白表達(dá)水平顯著增多，SP-B、SP-C蛋白表達(dá)水平及mRNA水