急性風(fēng)濕性心瓣膜炎蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、風(fēng)濕性心臟?。≧HD）簡(jiǎn)稱風(fēng)心病，因風(fēng)濕熱長(zhǎng)期、反復(fù)發(fā)作最終導(dǎo)致心內(nèi)膜永久性損傷的一種自身免疫性疾病。隨著青霉素預(yù)防GAS感染的應(yīng)用，RH和RHD的發(fā)病率有所下降，但是在發(fā)展中國(guó)家仍然較高。而關(guān)于其致病機(jī)制的研究卻未見(jiàn)明顯進(jìn)展，雖然動(dòng)物模型也被廣泛的應(yīng)用于RHD的研究，但成膜率卻不高，而且對(duì)于RHD急性期的研究仍處于空白，因此本研究通過(guò)改良并比較之前的造模方法，找出一種易于復(fù)制且與RHD相似度高的動(dòng)物模型，并應(yīng)用現(xiàn)代的蛋白質(zhì)組學(xué)高新技術(shù)

2、，探索急性風(fēng)濕性心瓣膜炎的差異蛋白表達(dá)譜。本研究分為兩個(gè)部分：
　　第一部分：急慢性期風(fēng)濕性心臟炎模型的比較。
　　目的：比較3種急慢性期風(fēng)濕性心臟炎模型，找出理想的動(dòng)物模型。
　　方法：抗原Ⅰ、Ⅱ分別為溶血性鏈球菌(GAS)與完全弗氏佐劑（CFA）、不完全弗氏佐劑（IFA）混合的乳化劑。Lewis雌鼠78只，隨機(jī)分為四組：A、B、C組各有大鼠18、18、24只，分別首次后足墊注射抗原Ⅰ。1周后，A、B組腹部皮下注射抗

3、原Ⅰ，每周1次，共4次，之后A組給予滅活的GAS，B組給予抗原Ⅱ，量及部位同前；C組尾靜脈注射抗原Ⅲ（未滅活的GAS），每周1次共4次。對(duì)照組D組18只，同樣方法注射，將GAS換成生理鹽水。于第7、12、24周末解剖大鼠，每次每個(gè)組處死6只。行血清類風(fēng)濕因子（RF）、抗溶血性鏈球菌抗體（ASO）、C-反應(yīng)蛋白（CRP）檢查及心臟組織HE、Masson染色。
　　結(jié)果：⑴C組大鼠存活18只，死亡率25％。⑵HE染色：第7周處死的A、

4、B、C組心肌炎發(fā)生率為83.3%（5/6）、66.7%（4/6）、50%（3/6），瓣膜炎發(fā)生率100%（6/6）、66.7%（4/6）、100%（6/6）；第12周處死的A、B、C組心肌炎發(fā)生率100%（6/6）、50%（3/6）、83.3%（5/6），瓣膜炎發(fā)生率100%（6/6）、66.7%（4/6）、100%（6/6）；第24周處死的A、B、C組心肌炎發(fā)生率100%（6/6）、50%（3/6）、83.3%（5/6），瓣膜炎發(fā)生率

5、83.3%（5/6）、50%（3/6）、50%（3/6）。12周A、C組心肌細(xì)胞間質(zhì)血管旁風(fēng)濕細(xì)胞聚集，瓣膜及心肌間質(zhì)灶狀炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，B組炎性細(xì)胞浸潤(rùn)程度未及A、C組明顯，少見(jiàn)有風(fēng)濕細(xì)胞聚集。24周慢性期損傷A組瓣膜纖維化程度及比率較B、C組高；D組心肌、瓣膜均無(wú)病理改變。Masson染色：與對(duì)照組相比，A組24周大鼠較多的膠原纖維在瓣膜組織聚集。
　　結(jié)論：A組CFA與GAS1：1混合乳化劑免疫大鼠5次，之后GAS連續(xù)刺激，能

6、為風(fēng)濕性心臟病的實(shí)驗(yàn)研究提供較好的可復(fù)制的動(dòng)物模型。
　　第二部分：急性風(fēng)濕性心瓣膜炎蛋白質(zhì)組學(xué)分析。
　　目的：鑒定急性風(fēng)濕性心瓣膜炎（Acute Rheumatic Valvulitis，ARV）潛在的蛋白標(biāo)志物并發(fā)現(xiàn)其差異蛋白質(zhì)表達(dá)譜，為急性期RHD的機(jī)制研究、早期診斷和治療提供理論依據(jù)。
　　方法：在前期研究的基礎(chǔ)上，設(shè)置ARV組和對(duì)照組每組各12只大鼠，應(yīng)用前期實(shí)驗(yàn)A組造模方法復(fù)制急性風(fēng)濕性心瓣膜炎模型，12

7、周解剖大鼠，通過(guò)HE染色篩選具有風(fēng)濕性心瓣膜炎改變的大鼠瓣膜前瓣，并收集其后瓣（每組10只）提取蛋白，iTRAQ標(biāo)記聯(lián)合2D LC-ESI-MS/MS進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)分析。采用Western blot、免疫組織化學(xué)分析法對(duì)差異改變蛋白GAPDH、CD9進(jìn)行驗(yàn)證。
　　結(jié)果：共鑒定出關(guān)于急性風(fēng)濕性心瓣膜炎的3931個(gè)蛋白質(zhì)的表達(dá)譜，并分析得差異蛋白質(zhì)共295個(gè)，其中176個(gè)表達(dá)上調(diào)，119個(gè)呈現(xiàn)下調(diào)的趨勢(shì)，其中GAPDH（差異蛋白倍數(shù)