HMGCS2參與安體舒通(SPR)保護(hù)糖尿病腎臟病變的分子機(jī)制研究.pdf

1、第一部分安體舒通（SPR）對(duì)糖尿病腎臟病變(DKD)保護(hù)作用的分子靶點(diǎn)篩查及驗(yàn)證
　　目的:探討安體舒通保護(hù)糖尿病腎臟病變的新分子靶點(diǎn)。
　　方法:將正常對(duì)照組db/m小鼠（db/m+ns組，n=6），糖尿病對(duì)照組db/db小鼠（db/db+ns組，n=6），安體舒通干預(yù)組db/db小鼠（db/db+SPR組，n=6）灌胃干預(yù)12周。利用透射電鏡觀察腎臟組織的超微結(jié)構(gòu),用免疫組化技術(shù)來(lái)檢測(cè)db/db2型糖尿病小鼠腎臟組織E-

2、cadherin的表達(dá)。用mRNA微陣列基因芯片分析小鼠腎臟組織表達(dá)譜并篩選出共同差異表達(dá)基因HMGCS2，用實(shí)時(shí)定量PCR及Westernblot、免疫組化檢測(cè)小鼠腎臟組織中HMGCS2及相關(guān)因子mRNA和蛋白表達(dá)。鏈脲佐菌素（STZ）誘導(dǎo)的1型糖尿病大鼠(T1DM組，n=3)在糖尿病病程12周后，分離對(duì)照組大鼠（NC組，n=3）和 T1DM組的腎小球和腎小管,應(yīng)用 Westernblot檢測(cè)HMGCS2的表達(dá)。應(yīng)用免疫組化檢測(cè)正常人

3、的腎臟（來(lái)源于既往器官捐獻(xiàn)）及糖尿病人的腎臟組織切片中HMGCS2的表達(dá)。
　　結(jié)果:1.電鏡提示糖尿病小鼠與非糖尿病對(duì)照組小鼠相比,腎小管上皮細(xì)胞線粒體腫脹明顯、數(shù)量減少，而安體舒通有效改善上述情況。db/db+SPR組E-cadherin表達(dá)較db/db+ns組明顯升高（P<0.05）。2.應(yīng)用mRNA微陣列篩選出基因HMGCS2；與非糖尿病小鼠腎臟組織相比，糖尿病病程18周的小鼠腎臟組織中HMGCS的mRNA及蛋白表達(dá)顯著升

4、高，而經(jīng)治療后HMGCS2在db/db+SPR組中表達(dá)較db/db+ns組顯著下調(diào)（P＜0.05）。分離的腎小管中 HMGCS2蛋白表達(dá)顯著高于分離的腎小球，且 STZ誘導(dǎo)的1型糖尿病大鼠的腎小管HMGCS2蛋白表達(dá)較對(duì)照組大鼠增高。糖尿病人腎小管的HMGCS2表達(dá)顯著高于正常人的表達(dá)（P＜0.05＝。
　　結(jié)論：HMGCS2在小鼠、大鼠及人的糖尿病腎臟組織中高表達(dá)，而且主要表達(dá)于腎小管中，安體舒通治療可下降其表達(dá)并改善糖尿病腎病

5、的腎小管病變，進(jìn)而減少腎小管上皮細(xì)胞的炎癥纖維化和EMT。
　　第二部分 HMGCS2介導(dǎo)糖尿病腎病近端腎小管損傷的分子機(jī)制
　　目的：探討HMGCS2介導(dǎo)糖尿病腎病近端腎小管損傷的分子機(jī)制
　　方法：培養(yǎng)人的腎小管上皮細(xì)胞HK-2并根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪M(jìn)行分組和干預(yù)。高糖及SPR干預(yù)組分為：正常葡萄糖（5.6mmol/L）、高濃度葡萄糖（25mmol/L）、SPR干預(yù)組（25mmol/L葡萄糖+0.1uM SPR）、高滲

6、對(duì)照（5.6mmol/L葡萄糖+19.4mmol/L甘露醇）、溶劑對(duì)照（25mmol/L葡萄糖+0.001uM酒精）培養(yǎng)72h;高脂干預(yù)組分為：正常葡萄糖（5.6mmol/L）、0.5％BSA對(duì)照、125μmol/L棕櫚酸、250μmol/L棕櫚酸及500μmol/L棕櫚酸培養(yǎng)24小時(shí);醛固酮干預(yù)組分為：正常葡萄糖（5.6mmol/L）、不同濃度的醛固酮（0.001μM，0.01μM，0.1μM）及SPR干預(yù)（0.1uM醛固酮+0.1u

7、M SPR）培養(yǎng)48小時(shí)；用酮體主要成分β羥基丁酸（β-HB）干預(yù)HK-2分為：正常葡萄糖（5.6mmol/L）、酮體（正常葡萄糖+0.1uMβ-HB）培養(yǎng)72h。用實(shí)時(shí)定量熒光PCR及Western免疫印跡方法檢測(cè)腎小管上皮細(xì)胞中Hmgcs2及相關(guān)因子mRNA或蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：1.高糖誘導(dǎo)HK-2的腎小管上皮細(xì)胞 Hmgcs2表達(dá)上調(diào),并使轉(zhuǎn)分化標(biāo)志物鈣粘蛋白E表達(dá)下調(diào)，轉(zhuǎn)分化增加（P＜0.01）;而SPR干預(yù)后，Hmgc

8、s2表達(dá)下調(diào)及轉(zhuǎn)分化標(biāo)志物鈣粘蛋白E表達(dá)上調(diào),轉(zhuǎn)分化降低（P＜0.01）。2.高脂誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞 HMGCS2 mRNA表達(dá)增加（P＜0.05）。3.0.1μM醛固酮誘導(dǎo)HMGCS2的mRNA和蛋白表達(dá)，SPR干預(yù)后HMGCS2表達(dá)下調(diào)（P＜0.05）。4.β-HB可誘導(dǎo)HK-2細(xì)胞中MCP-1、TNF-a的表達(dá)并使E-cadherin表達(dá)下調(diào)(p＜0.05）。
　　結(jié)論:高糖及醛固酮能誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞高表達(dá) HMGCS2從