基于UGTs和SULTs研究胡椒堿對(duì)姜黃素吸收代謝的影響.pdf

1、目的:
　　姜黃素的藥用價(jià)值非常之多，但其極低的生物利用度限制了姜黃素的臨床推廣。胡椒堿已被證實(shí)可以提高姜黃素的口服吸收，但其作用機(jī)制仍存在爭(zhēng)議。為了闡明胡椒堿提高姜黃素口服生物利用度的機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)考察了胡椒堿對(duì)姜黃素藥動(dòng)學(xué)和藥效學(xué)的影響以及胡椒堿對(duì)代謝酶UGTs和SULTs蛋白表達(dá)的影響，為指導(dǎo)胡椒堿和姜黃素的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　1.胡椒堿對(duì)姜黃素在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)影響研究
　　首先考察不同

2、濃度胡椒堿對(duì)姜黃素在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)影響，將對(duì)照組大鼠單獨(dú)灌胃姜黃素200mg/kg，聯(lián)合給藥組則是灌胃姜黃素和胡椒堿不同濃度配比(1∶1-100∶1)。接著考察不同時(shí)間給藥胡椒堿對(duì)姜黃素在大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)的影響，對(duì)照組單獨(dú)灌胃姜黃素200mg/kg，聯(lián)合給藥組則是提前不同時(shí)間(0h-8h)灌胃同一濃度的胡椒堿(10 mg/kg)。采用已建立的HPLC-MS/MS分析方法對(duì)血漿樣品中姜黃素的濃度進(jìn)行測(cè)定，利用DAS2.0藥動(dòng)學(xué)軟件對(duì)血藥濃

3、度進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，將得到的各項(xiàng)藥動(dòng)學(xué)參數(shù)進(jìn)行組間比較。
　　2.胡椒堿對(duì)UGTs和SULTs蛋白表達(dá)的影響研究
　　首先探討胡椒堿對(duì)大鼠的肝臟和回腸UGTs和SULTs蛋白表達(dá)的影響，將正常對(duì)照組大鼠給予灌胃溶劑，其他組則不同時(shí)間(0.5-8h)灌胃給予胡椒堿10mg/kg，用Western Blot法檢測(cè)肝臟和回腸中UGT1A1、UGT1A6、UGT1A8、SULT1A1和SULT1A3的蛋白表達(dá)。接著探討胡椒堿對(duì)細(xì)胞UGT

4、s和SULTs蛋白表達(dá)的影響，通過(guò)胡椒堿不同濃度(10-200μM)以及不同時(shí)間(0.5-8h)預(yù)處理細(xì)胞，用Western Blot法檢測(cè)細(xì)胞對(duì)UGT1A1、UGT1A6、UGT1 A8、SULT1A1和SULT1A3的蛋白表達(dá)。將得到的各組數(shù)據(jù)進(jìn)行組間比較。
　　3.姜黃素胡椒堿配伍對(duì)高脂血癥小鼠血脂的影響研究
　　將各組小鼠（除正常組外）肌注Triton WR-1339造成急性高脂血癥模型，給藥7天后取血，測(cè)定各組小鼠

5、血清TG、TC、HDL-C和LDL-C含量。
　　結(jié)果:
　　1.胡椒堿對(duì)姜黃素在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)影響研究
　　大鼠灌胃給藥姜黃素和胡椒堿不同濃度比的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與單獨(dú)給藥組相比，姜黃素與胡椒堿濃度比為20∶1時(shí)AUC(0-t)和Cmax提高最為明顯，分別為167％和129％，而清除率CL降低了61％。達(dá)峰時(shí)間Tmax和半衰期t1/2變化不明顯。
　　大鼠灌胃給藥姜黃素和胡椒堿不同時(shí)間差的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與單獨(dú)給

6、藥組相比，胡椒堿提前0.5h～8h給藥，AUC(0-t)提高了275％～597％(P＜0.05或P＜0.01)，其中胡椒堿提前6h給藥組的Cmax和AUC(0-t)(342.93±31.89μg/L，228.67±60.87μg/L·h)提高得最為顯著，分別提高了609％和597％(P＜0.01);其他參數(shù)如CL、Vd、t1/2不存在顯著性差異。
　　2.胡椒堿對(duì)UGTs和SULTs蛋白表達(dá)的影響研究
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在大

7、鼠肝臟中，胡椒堿對(duì)UGT1A6、UGT1A8和SULT1A1在6h時(shí)抑制明顯(P＜0.05或P＜0.01)。在大鼠回腸中，當(dāng)胡椒堿給藥6h和8h時(shí)，對(duì)UGT1A1、SULT1A1和SULT1A3的抑制作用最為顯著（P＜0.01）;而對(duì)UGT1 A6則在給藥6h時(shí)抑制最為明顯(P＜0.05)。
　　在采用不同濃度胡椒堿干預(yù)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，胡椒堿對(duì)HepG2細(xì)胞中UGTs和SULTs均有抑制作用。在Caco-2細(xì)胞中，胡椒堿僅對(duì)UGT1A

8、1、UGT1A8和SULT1A1有抑制作用(P＜0.05或P＜0.01)。
　　不同時(shí)間點(diǎn)干預(yù)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，胡椒堿對(duì)HepG2細(xì)胞UGT1A8和SULT1A1的蛋白表達(dá)在6h時(shí)抑制最為明顯(P＜0.01)。而在Caco-2細(xì)胞中，當(dāng)胡椒堿給藥6h和8h時(shí)，對(duì)UGT1A1、UGT1A6、UGT1 A8和SULT1A1的表達(dá)均顯著抑制(P＜0.05或P＜0.01)。
　　3.姜黃素胡椒堿配伍對(duì)高脂血癥小鼠血脂的影響研究

9、>　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，肌肉注射Triton WR-1339后，與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組小鼠血清的TC、TG和LDL-C含量顯著升高(P＜0.01)。與模型對(duì)照組相比，非諾貝特、胡椒堿提前4h和6h給藥組小鼠血清的TC、TG含量顯著降低（P≮0.01）;除姜黃素組外，聯(lián)合給藥組小鼠血清的LDL-C含量均降低(P＜0.01)。與單獨(dú)姜黃素組比較，聯(lián)合給藥中胡椒堿提前4h和6h給藥組小鼠血清的TC和TG含量顯著降低(P＜0.01);與同時(shí)聯(lián)