CyPA-CD147在兔動(dòng)脈粥樣硬化模型血管重構(gòu)中的表達(dá)研究.pdf

1、目的:
　　1、利用液氮凍傷結(jié)合高脂飲食建立兔動(dòng)脈粥樣硬化的動(dòng)物模型，探討兔動(dòng)脈粥樣硬化模型血管重構(gòu)情況。
　　2、HE染色、彈力纖維染色及MASSON染色分析兔血管內(nèi)膜及斑塊形態(tài)，測(cè)定CD147、CyPA、MMP-9血清學(xué)指標(biāo)變化，免疫組化分析三項(xiàng)指標(biāo)在血管中表達(dá)特點(diǎn)。測(cè)定CD147、CyPA在血管中的mRNA表達(dá)差異。
　　3、采用病理圖像分析系統(tǒng)分析血管重構(gòu)的相關(guān)指標(biāo)變化，將血清CD147、CyPA的表達(dá)與血管重

2、構(gòu)進(jìn)行相關(guān)回歸分析。
　　方法:
　　1、構(gòu)建動(dòng)物模型:按簡(jiǎn)單隨機(jī)方法將32只健康雄性新西蘭白兔分為對(duì)照組、液氮凍傷組、高脂飲食組、模型組，每組8只。對(duì)照組持續(xù)普通飲食，不做任何處理;模型組利用液氮凍傷血管內(nèi)膜結(jié)合高脂飲食的方法建立動(dòng)脈粥樣硬化模型;液氮凍傷組予以液氮凍傷血管內(nèi)膜后持續(xù)普通飲食;高脂飲食組持續(xù)高脂飲食，血管不做任何損傷處理。
　　2、血清學(xué)指標(biāo)測(cè)定:分別于實(shí)驗(yàn)開始前、高脂飲食第13周（實(shí)驗(yàn)結(jié)束前），采集

3、各組兔外周血，利用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定各組CD147、CyPA、MMP-9等水平。
　　3、病理組織觀察:4組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物于術(shù)后13周處死，每組取造模處或相對(duì)應(yīng)血管的一部分（約4cm），常規(guī)石蠟包埋切片，分別作HE染色、彈力纖維染色、Masson染色，普通光鏡下觀察組織病理學(xué)變化，并利用CyPA、CD147、VCAM11單克隆抗體進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色。逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)血管CD147mRNA和CyPAm

4、RNA的表達(dá)差異。
　　4、計(jì)算機(jī)病理圖像分析系統(tǒng)(Image-proplus6.0)分析血管重構(gòu)參數(shù)血管組織切片進(jìn)行彈力纖維染色后，采用病理圖像分析系統(tǒng)分析頸動(dòng)脈外彈力層圍繞面積(EELA)、內(nèi)彈力層圍繞面積(IELA)、管腔面積(LA)、最小管腔直徑(MLD)、最大內(nèi)膜厚度(MIT)、內(nèi)膜面積(IA)、中膜面積(MA)、管腔狹窄度(LS)。
　　5、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:所得數(shù)據(jù)采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料均采用

5、均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差的方式表示。多組樣本總體均數(shù)比較采用One-way ANOVA分析。方差齊時(shí)多組樣本均數(shù)間的多重比較運(yùn)用LSD-t檢驗(yàn)，方差不齊的樣本均數(shù)間的多重比較運(yùn)用Dunnett'sT3方式檢驗(yàn)。同組樣本間的前后比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)。認(rèn)為P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1、兔總體生長(zhǎng)情況
　　兔總體生長(zhǎng)良好，模型組的1只新西蘭白兔因麻醉過(guò)量死亡，液氮凍傷組的1只死于術(shù)中大出血，其余動(dòng)物全部完成實(shí)驗(yàn)，所

6、得30只動(dòng)物數(shù)據(jù)參與分析。
　　2、血清學(xué)指標(biāo)測(cè)定
　　血清CD147測(cè)定:實(shí)驗(yàn)前，4組兔血清CD147水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。在對(duì)照組，與實(shí)驗(yàn)前相比，血清CD147水平在第13周無(wú)明顯差異（P＞0.05）;在模型組，與實(shí)驗(yàn)前相比，血清CD147水平在第13周明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);在液氮凍傷組，與實(shí)驗(yàn)前相比，血清CD147水平在第13周明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);在高脂飲食

7、組，與實(shí)驗(yàn)前相比，血清CD147水平在第13周明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。4組間第13周血清CD147水平相比，有明顯差異，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且在模型組中表達(dá)較另外3組明顯升高。血清CyPA測(cè)定:實(shí)驗(yàn)前，4組間兔血清CyPA水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。在對(duì)照組，與實(shí)驗(yàn)前相比，血清CyPA水平在第13周無(wú)明顯差異（P＞0.05）;在模型組，與實(shí)驗(yàn)前相比，血清CyPA水平在第13周明顯升高，差異有統(tǒng)

8、計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);在液氮凍傷組，與實(shí)驗(yàn)前相比，血清CyPA水平在第13周明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;在高脂飲食組，與實(shí)驗(yàn)前相比，血清CyPA水平在第13周明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);4組間第13周血清CyPA水平相比，有明顯差異，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且在模型組中表達(dá)較另外3組明顯升高。
　　血清MMP-9測(cè)定:實(shí)驗(yàn)前，4組間兔血清MMP-9水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

9、在對(duì)照組，與實(shí)驗(yàn)前相比，血清MMP-9水平在第13周無(wú)明顯差異（P＞0.05）;在模型組，與實(shí)驗(yàn)前相比，血清MMP-9水平在第13周明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);在液氮凍傷組，與實(shí)驗(yàn)前相比，血清MMP-9水平在第13周明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;在高脂飲食組，與實(shí)驗(yàn)前相比，血清MMP-9水平在第13周明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;4組第13周血清MMP-9水平相比，有明顯差異，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

10、(P＜0.05)，且在模型組中表達(dá)較另外3組明顯升高。
　　3、免疫組化分析
　　對(duì)照組內(nèi)膜光整，可見散在少量巨噬細(xì)胞分布，未見CyPA、CD147、MMP-9抗體的表達(dá);中膜可見規(guī)整平滑肌細(xì)胞，未見明顯CyPA、CD147、MMP-9及RAM11抗體表達(dá)。模型組增生內(nèi)膜及斑塊內(nèi)可見CyPA、CD147、MMP-9呈片狀分布表達(dá)，且表達(dá)具有同區(qū)域分布的特點(diǎn)。與同一血管同一部位的巨噬細(xì)胞抗體染色對(duì)比顯示，CyPA、CD147、

11、MMP-9表達(dá)多集中于巨噬細(xì)胞聚集部位。液氮凍傷組內(nèi)膜輕度增生，中膜光滑規(guī)整，增生內(nèi)膜可見CyPA、CD147、MMP-9的散在表達(dá)。同時(shí)，可見三者表達(dá)區(qū)域相同。高脂飲食組CyPA、CD147、MMP-9在增生內(nèi)膜內(nèi)散在少量表達(dá)，內(nèi)膜未增生區(qū)域跟對(duì)照組相似，無(wú)表達(dá)。
　　4、RT-PCR檢測(cè)
　　CD147mRNA的表達(dá):在模型組、液氮凍傷組及高脂飲食組較對(duì)照組的表達(dá)明顯升高。4組間CD147mRNA表達(dá)對(duì)比有明顯差異，差異

12、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，且在模型組中表達(dá)較另外3組明顯升高。
　　CyPA mRNA的表達(dá):在模型組、液氮凍傷組及高脂飲食組較對(duì)照組的表達(dá)明顯升高。4組間CyPA mRNA表達(dá)對(duì)比有明顯差異，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且在模型組中表達(dá)較另外3組明顯升高。
　　5、血管重構(gòu)指標(biāo)測(cè)定
　　模型組、液氮凍傷組、高脂飲食組較對(duì)照組，內(nèi)膜明顯增厚，管腔明顯縮小，中膜面積明顯增厚，管腔狹窄度明顯增大，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

13、(P＜0.05）。4組內(nèi)膜面積(IA)相比，有明顯差異，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=22.54，P＜0.05），且在模型組中IA較另外3組明顯增厚;4組管腔面積(LA)相比，有明顯差異，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=8.61，P＜0.05），且在模型組中LA較另外3組明顯縮小;4組管腔狹窄度(LS)相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=458.00，P＜0.05)，且在模型組中LS較單純凍傷及高脂飲食明顯增加。結(jié)果表明，動(dòng)脈粥樣硬化的模型組較液氮凍傷組、高脂飲