熱脅迫下甲型副傷寒沙門氏菌的蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、甲型副傷寒沙門氏菌（Salmonella serotype paratyphi A）是一種不產(chǎn)生芽孢，無莢膜的革蘭氏陰性桿菌，能夠引起急性消化道傳染病。甲型副傷寒分布中國各地，常年散發(fā)，以夏秋季最多，發(fā)病以兒童、青壯年較多。甲型副傷寒沙門氏菌的所在介質(zhì)和熱適應(yīng)等因素的影響，甲型副傷寒沙門氏菌仍存在于食品當(dāng)中，威脅著食品安全。甲型副傷寒沙門氏菌的差異蛋白在熱刺激方面有非常重要的作用。因此，需要利用蛋白質(zhì)組學(xué)的研究方法研究甲型副傷寒沙門氏菌

2、的耐熱機(jī)理從而調(diào)控甲型副傷寒。
　　本研究：
　?。?）以甲型副傷寒沙門氏菌為研究對象，對其在不同介質(zhì)中進(jìn)行熱處理，通過測定甲型副傷寒沙門氏菌的殘存數(shù)量，采用單因素方差分析確定甲型副傷寒沙門氏菌的耐熱性大小。運(yùn)用預(yù)測微生物學(xué)的方法研究甲型副傷寒沙門氏菌的熱失活規(guī)律，選擇DoseResp模型擬合其失活曲線。結(jié)果表明甲型副傷寒沙門氏菌在不同介質(zhì)中的熱抗性存在顯著差異。55℃下熱處理25.0min，63℃下熱處理2.03min，7

3、2℃熱處理0.31min后，甲型副傷寒沙門氏菌均能被殺死。甲型副傷寒沙門氏菌在蛋白質(zhì)和脂肪含量高的介質(zhì)中更耐熱。DoseResp模型能夠成功擬合甲型副傷寒沙門氏菌的熱失活曲線。
　?。?）提取了不同介質(zhì)中55℃熱處理的全菌蛋白，進(jìn)行iTRAQ結(jié)合質(zhì)譜分析，采用軟件Mascot2.2和Proteome Discoverer1.4(thermo)進(jìn)行查庫鑒定及定量分析。鑒定出189個差異蛋白，對這些差異蛋白進(jìn)行GO注釋、GO富集分析和

4、Pathway代謝通路注釋分析。結(jié)果表明相對于介質(zhì)肥瘦肉1:1的灌腸，在介質(zhì)純瘦肉的灌腸中的DNA裂解酶（ligB）、逆境壓力蛋白（dps）、酸分子伴侶（HdeB）和一些未知功能的ACN89_20515、ynaF蛋白發(fā)生了作用，對脅迫環(huán)境進(jìn)行了適應(yīng)。
　?。?）提取了介質(zhì)純瘦肉的灌腸中熱脅迫和正常溫度下的全菌蛋白，進(jìn)行iTRAQ結(jié)合質(zhì)譜分析，采用軟件Mascot2.2和Proteome Discoverer1.4(thermo)進(jìn)

5、行查庫鑒定及定量分析。鑒定出205個差異蛋白，對這些差異蛋白進(jìn)行GO注釋、GO富集分析和Pathway代謝通路注釋分析。結(jié)果表明在介質(zhì)純瘦肉的灌腸中熱脅迫下甲型副傷寒沙門氏菌的酸分子伴侶（HdeB）、可能的運(yùn)輸?shù)鞍祝▂giW）、逆境壓力蛋白（dps）、反應(yīng)調(diào)控蛋白（copR）和未知功能的ACN89_20515蛋白發(fā)生了作用，對熱脅迫環(huán)境進(jìn)行了適應(yīng)。
　?。?）提取了介質(zhì)肥瘦肉1:1的灌腸中熱脅迫和正常溫度下的全菌蛋白，進(jìn)行iTRA

6、Q結(jié)合質(zhì)譜分析，采用軟件Mascot2.2和Proteome Discoverer1.4(thermo)進(jìn)行查庫鑒定及定量分析。鑒定出108個差異蛋白，對這些差異蛋白進(jìn)行GO注釋、GO富集分析和Pathway代謝通路注釋分析。結(jié)果表明在介質(zhì)肥瘦肉1:1的灌腸中熱脅迫下甲型副傷寒沙門氏菌的假定的外排泵蛋白（acrD）、趨藥性蛋白（tsr和cheA）、鞭毛運(yùn)動蛋白（fliG）、DNA結(jié)合蛋白（fis）、運(yùn)動蛋白（motA）、反應(yīng)調(diào)節(jié)蛋白（c