Angiopoietin調(diào)控宮頸癌增殖侵襲及血管生成的研究.pdf

1、目的:
　　血管緊張素及其受體主要特異性表達(dá)于血管內(nèi)皮細(xì)胞。本課題組前期人宮頸組織免疫組化顯示Ang1和Ang2及其受體Tie2在宮頸癌細(xì)胞中高表達(dá)，本實(shí)驗(yàn)旨在明確血管生成素對(duì)宮頸癌惡性生物學(xué)行為的影響。
　　方法:
　　1.免疫細(xì)胞化學(xué)（ICC）染色和實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-PCR）檢測(cè)正常宮頸上皮細(xì)胞及宮頸癌細(xì)胞系SiHa、Hela、C33A中Ang1、Ang2及Tie1、Tie2的表達(dá)。
　　2.外源性人

2、重組Ang1（rhAng1）及Ang2（rhAng2）用于上調(diào) Ang1、Ang2的水平；小干擾RNA（siAng1和siAng2）轉(zhuǎn)染下調(diào)Hela細(xì)胞中Ang1、Ang2的表達(dá)。
　　3.利用EDU細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、集落形成實(shí)驗(yàn)、Ki-67增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)經(jīng)上述處理后宮頸癌細(xì)胞增殖能力的變化。
　　4.利用劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)處理后宮頸癌細(xì)胞遷移能力的變化。
　　5.利用Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)處理

3、后宮頸癌細(xì)胞侵襲能力的變化。
　　6.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
　　(1)選取24只Balb/c裸鼠，皮下注射3×106Hela細(xì)胞成瘤后隨機(jī)分為4組,分別瘤內(nèi)注射：①5％葡萄糖（溶劑對(duì)照組）；②5%葡萄糖和in vivo-jetPEI（體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑對(duì)照組）；③in vivo-jetPEI和siAng1（siAng1組）；④in vivo-jetPEI和siAng2（siAng2組）。隔天測(cè)量移植瘤的徑線(xiàn)長(zhǎng)度（包括長(zhǎng)、短徑），根據(jù)長(zhǎng)短徑計(jì)算

4、腫瘤的體積，利用體積數(shù)據(jù)繪成腫瘤的增長(zhǎng)曲線(xiàn)。
　　(2)免疫組織化學(xué)法檢測(cè)四組移植瘤中Ang1、Ang2及波形蛋白（Vimentin）的表達(dá)情況。
　　(3)免疫組織化學(xué)法-免疫熒光（IF）檢測(cè)血管內(nèi)皮黏蛋白Endomucin及平滑肌肌動(dòng)蛋白α-SMA在各組移植瘤血管中的表達(dá)情況，評(píng)價(jià)血管數(shù)量及血管完整性。
　　結(jié)果:
　　1.宮頸癌細(xì)胞中Ang1、Ang2及Tie1、Tie2在mRNA和蛋白水平的表達(dá)均明顯高于

5、正常宮頸上皮（P<0.01）。
　　2.rhAng1及rhAng2刺激后，宮頸癌細(xì)胞的遷移及侵襲能力增強(qiáng)（P<0.05），而增殖能力無(wú)顯著的改變。
　　3.在Hela細(xì)胞中下調(diào)Ang1后，其遷移及侵襲能力均下降（P<0.05），下調(diào)Ang2后，細(xì)胞遷移能力下降，而細(xì)胞侵襲能力及增殖能力沒(méi)有明顯改變。
　　4.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：與對(duì)照組相比，siAng1組及siAng2組移植瘤的生長(zhǎng)受到抑制（P＜0.01）；
　　5.與對(duì)