淫羊藿低糖苷組分轉(zhuǎn)化規(guī)律、生物藥劑學(xué)性質(zhì)及其軟膠囊的初步研究.pdf

1、淫羊藿是傳統(tǒng)的補(bǔ)益類中藥，有強(qiáng)筋骨，祛風(fēng)濕，補(bǔ)腎陽(yáng)之功效。本文較全面的查閱了淫羊藿藥理作用的相關(guān)報(bào)道，發(fā)現(xiàn)淫羊藿在治療骨質(zhì)疏松上得到了廣泛的應(yīng)用，其發(fā)揮藥效的主要成分為黃酮類化合物。結(jié)合本實(shí)驗(yàn)室對(duì)淫羊藿十多年來(lái)的研究基礎(chǔ)，制備了溶解性和滲透性均較好的淫羊藿低糖苷組分。那么淫羊藿多糖苷向低糖苷轉(zhuǎn)化時(shí)存在怎樣的規(guī)律;所得低糖苷組分與淫羊藿總提取物相比，在藥效上是否具有優(yōu)效性呢？本課題帶著這些疑問(wèn)展開(kāi)了探討，具體研究?jī)?nèi)容如下:
　　第二

2、章我們選用四種具有代表性的淫羊藿品種，分別用紫外分光光度法和HPLC法分析了不同品種淫羊藿黃酮成分含量及各成分組成結(jié)構(gòu)差別。使用纖維素酶酶解淫羊藿多糖苷黃酮，以脫去一個(gè)或兩個(gè)糖苷而轉(zhuǎn)化為低糖苷;進(jìn)一步采用AB-8大孔樹(shù)脂分離純化，最終獲得淫羊藿低糖苷組分。采用UPLC/Q-TOF-MS分析、表征該組分，結(jié)合本實(shí)驗(yàn)室前期研究及文獻(xiàn)報(bào)道，辨析出組分包含8種化合物，分別為淫羊藿苷A、大花淫羊藿苷F、寶藿苷Ⅱ、箭藿苷A、箭藿苷B、鼠李糖基淫羊藿

3、次苷、7-O-rhamnosyl icarisideⅡ和寶藿苷Ⅰ。在組分酶解的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步單獨(dú)對(duì)朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C及淫羊藿苷酶解，朝藿定A7位脫去一分子的葡萄糖生成箭藿苷A;朝藿定B先是7位脫去一分子的葡萄糖生成箭藿苷B，然后又有一部分箭藿苷B3位脫去一分子木糖生成寶藿苷Ⅰ;朝藿定C7位脫去一分子的葡萄糖生成鼠李糖基淫羊藿次苷;淫羊藿苷7位脫去一分子的葡萄糖生成了寶藿苷Ⅰ。
　　第三章通過(guò)上述生物轉(zhuǎn)化工藝獲得了低糖苷組

4、分，本部分進(jìn)一步評(píng)價(jià)該組分活性。采用MTT法優(yōu)選了淫羊藿低糖苷組分對(duì)大鼠成骨樣細(xì)胞UMR-106細(xì)胞作用的最佳時(shí)間，并分析比較了不同品種淫羊藿低糖苷組分對(duì)UMR-106細(xì)胞的作用強(qiáng)度，結(jié)果表明，朝鮮淫羊藿低糖苷組分在濃度為30μg/mL，作用時(shí)間為48 h時(shí)，對(duì)細(xì)胞的增殖作用最為明顯。細(xì)胞內(nèi)、外堿性磷酸酶(ALP)活性的測(cè)定結(jié)果顯示，淫羊藿低糖苷組分(10、20μg·mL-1)能夠顯著增強(qiáng)細(xì)胞內(nèi)、外ALP活性，說(shuō)明淫羊藿低糖苷組分能夠促

5、進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖分化。
　　第四章獲得的低糖苷組分具有較好的活性，本部分進(jìn)一步探討、比較了淫羊藿低糖苷組分(HEFF)相對(duì)于淫羊藿提取物(HEE)的優(yōu)效性。
　　首先以切除卵巢的骨質(zhì)疏松大鼠為模型，分別測(cè)定各組大鼠血清中堿性磷酸酶(ALP)和抗酒石酸酸性磷酸酶（StrACP）活性，子宮及股骨濕重，脛骨生物力學(xué)性質(zhì)，股骨骨小梁參數(shù)，骨保護(hù)素(OPG)、破骨細(xì)胞分化因子(RANKL)蛋白表達(dá)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，淫羊藿淫羊藿提取物和低

6、糖苷組分均能較好的改善骨質(zhì)疏松所致的指標(biāo)變化，但是同等生藥劑量的HEFF與HEE相比，除中劑量組血清StrACP活性和股骨內(nèi)OPG蛋白表達(dá)有顯著差異外，其他指標(biāo)并無(wú)顯著性差異，這與我們的預(yù)期不相吻合。我們推測(cè)可能有以下兩個(gè)原因:在此給藥劑量下，大鼠腸道菌群數(shù)量能夠較好的使多糖苷轉(zhuǎn)化為低糖苷而發(fā)揮藥效;淫羊藿低糖苷分溶解性較差，限制了其生物利用度。為了探究是否由于第一種原因所造成的，作者又選用無(wú)完整腸道的骨質(zhì)疏松斑馬魚為模型來(lái)進(jìn)行淫羊藿低

7、糖苷組分優(yōu)效性的評(píng)價(jià)。
　　將受精后3d（3 dfp）的斑馬魚幼魚隨機(jī)分為空白培養(yǎng)基組、0.5％ DMSO溶媒對(duì)照組、潑尼松龍組、依替膦酸二鈉組、不同濃度的淫羊藿低糖苷組分(生藥量分別為6.56，13.125，26.25，52.5，105mg·L-1)組和淫羊藿提取物組(生藥量分別為6.56，13.125，26.25，52.5，105 mg·L-1)。每天換液至9 dfp，麻醉致死后采用茜素紅對(duì)幼魚骨骼進(jìn)行染色，然后對(duì)骨染色面積及

8、累積光密度進(jìn)行定量分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示HEFF和HEE均可增加骨質(zhì)疏松斑馬魚頭部骨染色面積和累積光密度，具有一定的濃度依賴性，HEFF組與HEE組相比，在生藥濃度為13.125，26.25，52.5，105 mg·L-1時(shí)，頭部骨累積光密度具有顯著性差異。
　　第五章淫羊藿低糖苷組分的優(yōu)效性與其生物藥劑學(xué)性質(zhì)密切相關(guān)。本部分對(duì)淫羊藿低糖苷組分的生物藥劑學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了研究，并對(duì)其進(jìn)行分類。我們首先測(cè)定了組分中八種化合物在水及不同pH的緩

9、沖鹽中的平衡溶解度及油水分配系數(shù);進(jìn)一步對(duì)其相似性進(jìn)行分析，采用質(zhì)量權(quán)重系數(shù)法對(duì)組分整體性質(zhì)進(jìn)行整合表征，計(jì)算出組分整體的平衡溶解度及油水分配系數(shù)。結(jié)果表明組分平衡溶解度較差，且對(duì)pH較為敏感，油水分配系數(shù)LogP介于1.91～3.04之間，提示藥物在腸道內(nèi)具有較好的吸收性。根據(jù)中藥BCS分類系統(tǒng)，淫羊藿低糖苷組分具有低溶解性，高滲透性，屬于Ⅱ類中藥組分。
　　第六章為了解決淫羊藿低糖苷組分在水中溶解性低的問(wèn)題，遵循中藥實(shí)際應(yīng)用中

10、經(jīng)濟(jì)、方便的原則，我們將低糖苷組分設(shè)計(jì)為以大豆油為基質(zhì)，蜂蠟和大豆磷脂分別為助懸劑和潤(rùn)濕劑的混懸劑。分別單因素考察處方中各成分的用量，然后用正交法確定了最佳比例為組分∶基質(zhì)∶蜂蠟∶大豆磷脂=1.0∶1.5∶0.1∶0.04，該比例下所得的內(nèi)容物具有較好的穩(wěn)定性和流動(dòng)性。
　　綜合上述實(shí)驗(yàn)可知，筆者成功的制備出了淫羊藿低糖苷組分，并對(duì)淫羊藿多糖苷向低糖苷的酶解轉(zhuǎn)化規(guī)律進(jìn)行探討，然后分別以骨質(zhì)疏松大鼠和骨質(zhì)疏松斑馬魚為模型，評(píng)價(jià)了淫羊