厚樸中抗氧化組分的微流控化學(xué)發(fā)光芯片測試研究.pdf

1、隨著現(xiàn)代細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)迅速發(fā)展，新技術(shù)被不斷地引入到藥物活性成分檢測領(lǐng)域，使得從大量的天然產(chǎn)物成分中發(fā)現(xiàn)活性分子或分子群成為可能，而滿足快速、低耗、高通量、高內(nèi)涵等需求的微流控芯片分析技術(shù)的運(yùn)用，更是推進(jìn)了檢測方法的進(jìn)步，已成為藥物活性成分檢測的熱點(diǎn)研發(fā)方向之一。微流控分析技術(shù)具有的分析微型化、良好的透光性、無毒性、微納級尺寸、高通量化、可集成化和良好的生物相容性等特點(diǎn)，為天然產(chǎn)物活性組分的活性檢測提供了新的方法和技術(shù)平臺(tái)。

2、
　　本論文主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下：
　?、僭O(shè)計(jì)并制作了一種集成有四個(gè)重復(fù)結(jié)構(gòu)單元的微流控化學(xué)發(fā)光（Chemiluminescence,CL）芯片，以實(shí)現(xiàn)用來對中藥材厚樸中的主要抗氧化組分厚樸酚、和厚樸酚進(jìn)行定量測試，基于化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度與抗氧化關(guān)系模型，同時(shí)對其提取物的分子水平的抗氧化活性進(jìn)行分析。所設(shè)計(jì)的微流控化學(xué)發(fā)光芯片包含蛇形通道、高效環(huán)形混合通道和橢圓形檢測區(qū)等結(jié)構(gòu)單元。此微流控CL芯片一次可完成實(shí)現(xiàn)多濃度多樣本的檢測

3、。實(shí)驗(yàn)采用luminol-H2O2-Cu2+化學(xué)發(fā)光體系對厚樸酚、和厚樸酚標(biāo)品進(jìn)行CL測試，驗(yàn)證了該芯片和測試方法的可行性，并得出在Luminol濃度為0.50mmol·L-1，H2O2濃度為1.00mmol·L-1，Cu2+濃度為0.50mmol·L-1，流速10.0μL·min-1的最佳測試條件。進(jìn)而對厚樸藥材五種醇提物進(jìn)行CL測試，顯示五種提取物對H2O2均有一定的清除作用，且1.00g·mL-1的五種提取物的當(dāng)量抗氧化活性強(qiáng)弱順

4、序?yàn)椋?0％乙醇提取物>60%乙醇提取物>40%乙醇提取物>水提取物>20%乙醇提取物。
　?、谠O(shè)計(jì)并制作了含有3×12個(gè)檢測窗口的微流控細(xì)胞培養(yǎng)芯片，該芯片可實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的連續(xù)培養(yǎng)和厚樸酚、和厚樸酚的細(xì)胞抗氧化活性分析。芯片主要包含玻璃基片、細(xì)胞培養(yǎng)層PDMS和試劑通入層PDMS，共有3條平行的細(xì)胞培養(yǎng)通道，12條試劑及樣本注入通道，3×12個(gè)化學(xué)發(fā)光檢測窗口，一次可完成2個(gè)樣本的6個(gè)濃度篩選，并可在熒光化學(xué)發(fā)光微孔板檢測儀上實(shí)現(xiàn)測

5、試。厚樸酚、和厚樸酚與芯片上培養(yǎng)的HepG2細(xì)胞作用24h,細(xì)胞存活率大于90%。以芯片上培養(yǎng)的人肝癌細(xì)胞HepG2為載體，以Luminol為化學(xué)發(fā)光探針，采用2,2’-偶氮二異丁基脒二鹽酸鹽（2,2′-azobis(2-amidinopropane) dihydrochloride，ABAP）為細(xì)胞內(nèi)ROS（Reactive oxygen species，ROS）引發(fā)劑，測得厚樸酚、和厚樸酚IC50值分別為12.03±0.05μg/m