可溶性RAGE及XAV-939通過(guò)RAGE-Wnt-β-catenin信號(hào)通路抑制db-db小鼠動(dòng)脈鈣化.pdf

1、目的：探討不同濃度的可溶性RAGE（sRAGE）及XAV-939對(duì)db/db小鼠動(dòng)脈鈣化程度及相關(guān)成骨蛋白表達(dá)的影響；通過(guò)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步了解RAGE蛋白與Wnt/β-catenin信號(hào)通路的關(guān)系。方法：（1）將購(gòu)買(mǎi)的8周db/db小鼠飼養(yǎng)在SPF室，飼養(yǎng)1周后隨機(jī)分為對(duì)照組、sRAGE組、XAV-939組、sRAGE+XAV-939組，每只小鼠均予以高脂飲食（HFD）飼養(yǎng)；（2）對(duì)照組予以腹腔注射100ul生理鹽水（NS）；可溶性RAG

2、E組（即sRAGE組）分為兩組，即低劑量組和高劑量組，低劑量組予以0.5ug sRAGE和高劑量組予以2ug sRAGE行腹腔注射；XAV-939組同樣分為兩組，即低劑量組0.1mg XAV-939和高劑量組0.4mg XAV-939腹腔注射；可溶性RAGE+XAV-939組（即sRAGE+XAV-939組）予以2ug sRAGE+0.4mg XAV-939腹腔注射；（3）在實(shí)驗(yàn)前1天及實(shí)驗(yàn)中的第7、14、21、28天時(shí)分別稱(chēng)取每只小鼠

3、的體重及同期采用血糖儀測(cè)量其隨機(jī)血糖，并記錄，第28天采用脫頸處死小鼠后，立即使用剪刀打開(kāi)小鼠的胸腔，并使用1ml空針行心臟抽血，離心后取上清液，分裝于EP管中，保存于-20℃冰箱備用，并分離主動(dòng)脈行鈣化及相關(guān)成骨蛋白表達(dá)的檢測(cè)；（4）采用ELISA測(cè)血漿中AGEs的含量，對(duì)大體主動(dòng)脈行Von Kossa染色及鈣含量測(cè)定，并對(duì)部分主動(dòng)脈做成石蠟切片，行切片彈性纖維染色以及免疫組化；（5）利用蛋白印跡技術(shù)檢測(cè)主動(dòng)脈中β-catenin及鈣

4、化相關(guān)蛋白R(shí)unx2、BMP-2、OPG的表達(dá)。結(jié)果：（1）在小鼠體內(nèi)運(yùn)用sRAGE或XAV-939后，可以降低其動(dòng)脈鈣化、鈣含量及膠原蛋白的表達(dá)，并保持彈性纖維的完整性；（2）可溶性RAGE可以通過(guò)減弱β-catenin的表達(dá)，從而抑制Wnt通路，并下調(diào)相關(guān)成骨蛋白R(shí)unx2、BMP-2的表達(dá)，并呈劑量依賴(lài)。結(jié)論：在糖尿病小鼠體內(nèi)運(yùn)用抑制劑sRAGE或XAV-939后，可通過(guò)調(diào)控β-catenin的轉(zhuǎn)錄活性，下調(diào)BMP-2、Runx2