線粒體能量代謝障礙及凋亡：術(shù)后腸麻痹的一種潛在機(jī)制.pdf

1、目的：
　　本研究旨在探究腸道肌層線粒體能量代謝障礙及平滑肌細(xì)胞凋亡在術(shù)后腸麻痹(POI)發(fā)生發(fā)展的中的作用。并探究腸道肌層氧化應(yīng)激與線粒體能量代謝障礙及平滑肌細(xì)胞凋亡之間的關(guān)系。
　　方法：
　　將成年雄性SPF級SD大鼠（體重230±10g，購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)公司）稱重編號(hào)隨機(jī)分為3組，每組8只:(1)空白對照(NC)組:未經(jīng)任何麻醉以及手術(shù)操作。(2)假手術(shù)(SC)組:開腹后僅翻動(dòng)腸袢，后關(guān)腹;(3)腸

2、道操作(IM)組:按照以往研究中廣泛采用的棉簽反復(fù)擦拭大鼠小腸的方法制作POI大鼠模型。SC組和IM組再按時(shí)間點(diǎn)分為術(shù)后第3、6、12和24小時(shí)組。采用棉簽擦拭大鼠小腸（約15分鐘）的方法制作大鼠POI模型。各組術(shù)后24小時(shí)采用測定經(jīng)灌胃法后胃腸道各段異硫氰酸熒光素標(biāo)記的右旋糖酐的分布的方法檢測胃腸道蠕動(dòng)功能，并在術(shù)后對應(yīng)時(shí)間點(diǎn)（第3、6、12、24小時(shí)）檢測腸道肌層中的氧自由基(ROS)含量，丙二醛(MDA)含量和ATP酶（鈉鉀ATP

3、酶和鈣鎂ATP酶）活性。采用實(shí)時(shí)定量熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)和蛋白印跡(WB)分析檢測腸道肌層中乙醛脫氫酶2(ALDH2)、B細(xì)胞淋巴瘤2（Bcl-2）和Bcl-2相關(guān)X蛋白(Bax)的表達(dá)情況。采用高效液相色譜法(HPLC)檢測腸道肌層中ATP，ADP和AMP的含量。運(yùn)用透射電子顯微鏡(TEM)觀察腸道肌層中平滑肌細(xì)胞及線粒體的超微結(jié)構(gòu)改變。
　　結(jié)果：
　　與NC和SC組相比，IM組的腸道蠕動(dòng)明顯延緩(P＜0.

4、01)。腸道操作導(dǎo)致腸道肌層ROS含量和MDA水平明顯升高（P＜0.01），且均在6h時(shí)達(dá)到最高峰（P＜0.01）。腸道操作還能導(dǎo)致ALDH2水平及Bcl-2/Bax比率顯著升高(P＜0.01)，并均在6h時(shí)達(dá)到最高峰(P＜0.01)。腸道操作還導(dǎo)致ATP和ADP水平下降（P＜0.01），并在12h時(shí)達(dá)到最低峰（P＜0.01），腸道操作還AMP水平升高（P＜0.01），并在12h時(shí)達(dá)到最高峰(P＜0.01)。鈉鉀ATP酶和鈣鎂ATP酶活

5、性在3h時(shí)顯著升高，隨后迅速下降，并在12h時(shí)達(dá)到最低峰（P＜0.01）。在NC和SC組中，通過電鏡觀察得到的電子顯微圖顯示腸道肌層正常的平滑肌細(xì)胞和線粒體形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)。而在IM組，我們觀察到平滑肌細(xì)胞核皺縮和染色質(zhì)濃縮，線粒體腫脹破裂以及扭曲的嵴結(jié)構(gòu)。
　　結(jié)論：
　　在POI動(dòng)物大鼠腸道肌層中，氧化應(yīng)激水平顯著提高，線粒體能量代謝發(fā)生障礙以及平滑肌細(xì)胞凋亡的發(fā)生。我們的研究為腸道肌層細(xì)胞線粒體能量代謝障礙和平滑肌細(xì)胞凋亡是