力竭運(yùn)動(dòng)及鈍挫傷對(duì)大鼠骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞及Pax7-CBF1-DAPT的影響.pdf

1、目的:研究力竭運(yùn)動(dòng)及鈍挫傷對(duì)大鼠骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞及Pax7/轉(zhuǎn)錄因子(CBFl)/γ-serectase分泌酶抑制劑(DAPT)的影響，探究骨骼肌損傷的修復(fù)機(jī)制。
　　方法:實(shí)驗(yàn)選取24只五周齡SD雄性大鼠，隨機(jī)分為4組，每組6只，分別是力竭運(yùn)動(dòng)組（Exhaustive Exercise Group，E，3組×6只）和安靜對(duì)照組（Control，C，1組×6只），其中力竭運(yùn)動(dòng)組各組分別進(jìn)行一次力竭性下坡跑運(yùn)動(dòng)達(dá)到力竭狀態(tài)，并按照宰殺

2、時(shí)間分別標(biāo)注為力竭即刻組(Exhaustive，EO)，力竭后24h組(E24)和力竭后48h組(E48)。另外依舊選取18只五周齡SD雄性大鼠隨機(jī)分（3組×6只）作為鈍挫傷組(Contusion Group，D)，對(duì)各組依次進(jìn)行重物擊打鈍挫，同樣按照宰殺時(shí)間分別標(biāo)注為鈍挫傷即刻組(DO)，鈍挫傷后24h組(D24)和鈍挫傷后48h組(D48)。在安靜的狀態(tài)下采用20％烏拉坦對(duì)安靜對(duì)照組，力竭運(yùn)動(dòng)組和鈍挫傷組于不同的時(shí)間問(wèn)隔分別進(jìn)行腹腔

3、注射麻醉，宰殺取血制備血清，并取下右側(cè)腓腸肌，將腓腸肌一分為二，一份立即進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，另一份和血清一起在—80℃冰箱保存，用ELISA法檢測(cè)Pax7、CBF1、DAPT的含量變化。另取新生3日齡鼠3只，宰殺后同樣取右側(cè)腓腸肌進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)。
　　結(jié)果:(1)根據(jù)肌衛(wèi)星細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:經(jīng)過(guò)對(duì)骨骼肌進(jìn)行分離處理和純化等一系列體外培養(yǎng)后，體外獲得高純度的肌衛(wèi)星細(xì)胞。觀察在肌衛(wèi)星細(xì)胞培養(yǎng)的初期，除新生鼠組外各組衛(wèi)星細(xì)胞增殖均處

4、于緩慢狀態(tài)，從第五天開(kāi)始大量增殖，到第七天均達(dá)到各自增殖的高峰期，之后增殖速度便開(kāi)始慢慢下降。各組對(duì)比顯示:安靜對(duì)照組細(xì)胞增殖最為緩慢且數(shù)量也最少，鈍挫傷組與力竭運(yùn)動(dòng)組均增殖迅速且含量較多，但細(xì)研之，兩組之間還是有明顯的差異，即鈍挫傷組的增殖速度和數(shù)量要比力竭運(yùn)動(dòng)組高。另外新生鼠組的骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果與各組比較，含量最高且增殖速度最快。培養(yǎng)第二天便可見(jiàn)少量梭形細(xì)胞，之后開(kāi)始大量增殖，培養(yǎng)第五天可見(jiàn)到有少數(shù)衛(wèi)星細(xì)胞相互融合形成具有中央

5、細(xì)胞核的肌管。
　　(2) Elisa結(jié)果顯示:力竭運(yùn)動(dòng)組和鈍挫傷組各組骨骼肌、血清中Pax7和CBF1的含量與對(duì)照組相比均顯著上升，且具有顯著性差異(P＜O.05);DAPT在各組骨骼肌、血清中的含量與對(duì)照組相比均顯著下降，且具有顯著性差異(P＜0.05)。而力竭運(yùn)動(dòng)組和鈍挫傷組之間無(wú)顯著性差異。
　　結(jié)論:
　　(1)對(duì)比各組肌衛(wèi)星細(xì)胞的增殖情況發(fā)現(xiàn):安靜對(duì)照組無(wú)明顯增殖現(xiàn)象，而在新生鼠在未受任何外界刺激的作用下體

6、內(nèi)衛(wèi)星細(xì)胞的增殖含量和速度都是最高的，說(shuō)明肌衛(wèi)星細(xì)胞在新生鼠體內(nèi)本身就處于激活和分化的狀態(tài)。鈍挫傷組和力竭運(yùn)動(dòng)組增殖速度和數(shù)量介于對(duì)照組和新生鼠之間，但鈍挫傷對(duì)于肌衛(wèi)星細(xì)胞的激活程度更為強(qiáng)烈，說(shuō)明鈍挫傷對(duì)肌肉的損傷程度要大于力竭運(yùn)動(dòng)。
　　(2)力竭運(yùn)動(dòng)和鈍挫傷可以促進(jìn)Pax7和CBF1的含量上升，但下調(diào)DAPT的含量。Pax7和CBF1可能在骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞激活及骨骼肌損傷修復(fù)中起著正向調(diào)節(jié)的作用，而DAPT可能起著負(fù)向調(diào)節(jié)作用。