兔神經(jīng)介素S及其受體基因的克隆及熱應(yīng)激對(duì)下丘腦-垂體-腎上腺軸NMS mRNA表達(dá)的影響.pdf

1、神經(jīng)介素S（Neuromedin S，NMS），是日本學(xué)者M(jìn)ori等人于2005年發(fā)現(xiàn)的一種神經(jīng)肽，主要分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)、脾臟和睪丸組織。與神經(jīng)介素U（NeuromedinU，NMU）享有相同的兩個(gè)受體，分別是NMUR1和NMUR2。主要參與晝夜節(jié)律、攝食、生殖、神經(jīng)內(nèi)分泌等的調(diào)節(jié)。對(duì)NMS及其受體的研究主要集中在人、大鼠和小鼠等動(dòng)物上，文獻(xiàn)中暫無(wú)對(duì)兔NMS及其受體的研究。本研究參照GenBank中已發(fā)表的哺乳動(dòng)物（豬、牛、人、大鼠、

2、小鼠等）的基因保守區(qū)設(shè)計(jì)引物，利用RT-PCR技術(shù)克隆了兔NMS、NMUR2基因部分序列，應(yīng)用生物信息學(xué)技術(shù)對(duì)其基因進(jìn)行了序列分析和蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能預(yù)測(cè)；其次，根據(jù)克隆出的已知兔NMS、NMUR2序列，利用Primer5.0軟件重新設(shè)計(jì)PCR引物，對(duì)NMS、NMUR2 mRNA在兔體內(nèi)各個(gè)組織的分布進(jìn)行了研究。并探討了熱應(yīng)激時(shí)下丘腦-垂體-腎上腺軸NMS表達(dá)的變化。結(jié)果如下：
　　 （1）用RT-PCR技術(shù)首次成功地克隆了兔NM

3、S和NMUR2基因部分序列，NMS基因片段長(zhǎng)370bp，NMUR2長(zhǎng)493 bp，已經(jīng)提交到GenBank（登錄號(hào)：GQ167047、GQ167048）。
　　 （2）經(jīng)DNASTAR軟件分析兔NMS含有123個(gè)氨基酸，NMUR2含有164個(gè)氨基酸。氨基酸比對(duì)發(fā)現(xiàn)，兔NMS前體與羊、豬和牛同源性分別為97.6％、99.0％和95.1％；與人、黑猩猩、小鼠和大鼠同源性分別為79.7％、79.7％、70.7％和61.8％。兔NMUR

4、2氨基酸與羊、豬和牛同源性分別為92.7％、87.5％和89.6％；與人、小鼠和大鼠的同源性分別為80.5％、76.2％和76.2％。
　　 （3）運(yùn)用生物信息學(xué)技術(shù)預(yù)測(cè)，兔NMS基因等電點(diǎn)（pI）為10.57，其二級(jí)結(jié)構(gòu)以α螺旋和無(wú)規(guī)卷曲為主；兔NMUR2基因等電點(diǎn)（pI）為9.91，其二級(jí)結(jié)構(gòu)以α螺旋和折疊為主。
　　 （4）兔NMS和NMUR2 mRNA在體內(nèi)分布較廣泛，NMS mRNA在下丘腦、中腦、延髓、氣管、

5、脾等組織表達(dá)；NMUR2 mRNA在下丘腦、中腦、延髓、海馬、大腦皮質(zhì)、垂體、心、脾、子宮、卵巢等組織表達(dá)。
　　 （5）采用隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱建立42℃熱應(yīng)激兔的模型；使用半定量RT-PCR方法觀測(cè)熱應(yīng)激0.5 h、1 h和2 h后兔下丘腦、垂體、腎上腺軸中NMS mRNA的表達(dá)情況。在下丘腦NMS mRNA表達(dá)隨著熱應(yīng)激時(shí)間的增加而增加，在1 h表達(dá)豐度開始升高（P<0.05），2 h表達(dá)豐度最高（P<0.05）；在垂體N