TNF-α對大鼠舌黏膜創(chuàng)傷愈合及其過程中上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響.pdf

1、背景與目的：
　　口腔黏膜是人體中防止外界有害刺激的的屏障，可以保護上皮的功能完整，而且還具有感覺功能。目前很多因素都會造成口內(nèi)黏膜的創(chuàng)傷(包括意外事故、手術、燙傷、不明原因的口腔潰瘍、不良修復體以及正畸附件等引起的口腔黏膜創(chuàng)傷等)。口腔黏膜的創(chuàng)傷不僅帶給患者身體上的疼痛，影響正常的生理功能(如咀嚼、語言及吞咽)，還有可能造成心理上的障礙，但是當前臨床上治療口腔黏膜創(chuàng)傷多以消炎止痛抗感染為主，缺乏促進創(chuàng)傷快速愈合的藥物。因此如何快

2、速有效地促進患者口腔黏膜創(chuàng)傷愈合成為我們研究的重點。
　　近年來對于生長因子在皮膚創(chuàng)傷愈合的作用成為大家關注的焦點，其中一些生長因子已經(jīng)被用于臨床來促進創(chuàng)傷的愈合，而且取得了很好的效果。目前關于腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factorα, TNF-α)對皮膚創(chuàng)傷愈合影響的研究則存在著異議，關于其在口腔黏膜中的研究鮮有報道，本研究擬初步探討TNF-α在大鼠舌黏膜創(chuàng)傷愈合過程中的影響及作用機制。
　　實驗方法

3、：
　　實驗一：取60只8周齡Wistar大鼠，用直徑為3mm的皮膚活檢器于其舌背部黏膜處作一圓形缺損模型，將大鼠隨機分為TNF-α+凝膠實驗組(TNF-α的濃度為20ng/ml)和空白凝膠對照組。兩組大鼠分別再分為0h,24h,48h,72h和96h五個亞組各6只，每組大鼠分別于0h,24h,48h,72h和96h處死，通過HE染色，體外觀察及計算分析對比兩組大鼠舌黏膜創(chuàng)口愈合過程及創(chuàng)口面積變化。
　　實驗二：動物舌黏膜創(chuàng)

4、傷模型制備及標本的采集同第一部分，標本冰凍切片通過免疫組織熒光法檢測與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-to-mesenchymal transition, EMT)相關蛋白 E-鈣黏蛋白(E-cadherin, E-cad)，成纖維細胞特異性蛋白-1(Fibroblast specific proteins, FSP1)和波形蛋白(Vimentin)在兩組大鼠舌黏膜創(chuàng)傷愈合過程中的表達。
　　實驗三：在六孔板體外培養(yǎng)人類口腔永

5、生化上皮細胞(HIOEC)，分為 TNF-α組和空白對照組兩組各兩個孔，作劃痕實驗并分別于0h,24h,48h和72h拍照來觀察比較TNF-α組上皮細胞形態(tài)的變化和其對劃痕愈合速度的影響。
　　結(jié)果：
　　實驗一：標本測量和HE染色結(jié)果具有一致性，均顯示術后24h,48h,72h及96h TNF-α凝膠實驗組愈合快于空白對照組(P<0.001)；實驗二：免疫熒光結(jié)果顯示在24h,48h,72h和96h創(chuàng)傷部位上皮中表達間質(zhì)細

6、胞表型Vimentin和FSP1的細胞數(shù)目TNF-α凝膠實驗組較對照組明顯增加，有顯著性差異(P<0.05)；實驗三：細胞劃痕驗中發(fā)現(xiàn) TNF-α組 HIOEC細胞形態(tài)發(fā)生間質(zhì)樣改變，相對空白組， TNF-α組劃痕愈合速度更快，在72h時細胞已經(jīng)長滿劃痕區(qū)。
　　結(jié)論：
　　TNF-α可以促進舌黏膜創(chuàng)傷的愈合；大鼠舌背部黏膜創(chuàng)傷愈合過程中發(fā)生了EMT現(xiàn)象并且TNF-α能夠促進大鼠舌黏膜創(chuàng)傷愈合過程中EMT的發(fā)生；另外TNF-