丁苯酞對(duì)急性缺血性腦卒中HGF表達(dá)、認(rèn)知功能及腦灌注的影響.pdf

1、缺血性腦卒中作為臨床常見的急重癥，不僅導(dǎo)致肢體殘疾，還會(huì)造成認(rèn)知功能障礙，嚴(yán)重影響生活質(zhì)量，近年更是出現(xiàn)明顯年輕化趨勢(shì)，因此缺血性腦卒中一直備受學(xué)界關(guān)注。目前，缺血性腦血管病的防治研究亦成為全世界醫(yī)學(xué)界的一個(gè)熱門課題，其中腦動(dòng)脈狹窄閉塞是缺血性腦卒中的一個(gè)重要的病變基礎(chǔ)，在我國(guó)，約1/3缺血性腦卒中患者有顱內(nèi)動(dòng)脈狹窄。對(duì)腦缺血的治療核心在于對(duì)神經(jīng)元損傷的保護(hù)以及血管再通，但是由于受時(shí)間窗所限，溶栓再通治療不能得以廣泛及時(shí)應(yīng)用，能在超早期

2、接受溶栓治療的患者不到5％，加上溶栓治療有許多禁忌癥，以及溶栓治療過(guò)程中可能出現(xiàn)的腦缺血再灌注損傷，所以在腦梗塞后進(jìn)行神經(jīng)保護(hù)就顯得尤為重要。而目前臨床治療腦梗塞的外源性的神經(jīng)保護(hù)劑幾乎無(wú)效或療效甚微，因此許多學(xué)者把研究轉(zhuǎn)向?qū)ふ矣行У貎?nèi)源性神經(jīng)保護(hù)措施。能否在急性缺血性腦卒中發(fā)生后，盡可能逆轉(zhuǎn)缺血性腦卒中患者病理生理過(guò)程，延緩細(xì)胞凋亡組織壞死的進(jìn)程，減輕神經(jīng)元的損傷，重新疏通血管或建立有效的代償循環(huán)，是考察藥物對(duì)腦缺血保護(hù)作用的要點(diǎn)。<

3、br>　　肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(Hepatocyte Growth Factor，HGF)是一種肝細(xì)胞特有的血小板衍生物，具有很強(qiáng)的促有絲分裂的作用，可以誘導(dǎo)上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞離散和運(yùn)動(dòng)。HGF是一種具有多種功能活性的細(xì)胞因子，能刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)，誘導(dǎo)血管生成，已有臨床研究表明HGF作為缺血性腦卒中生物學(xué)標(biāo)記物，在腦卒中急性期和慢性康復(fù)階段發(fā)揮著不同的作用。
　　丁苯酞在缺血性腦卒中治療領(lǐng)域里擁有多個(gè)作用靶點(diǎn)，故包含多個(gè)方

4、面的作用機(jī)制。而HGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及其下游基因產(chǎn)物對(duì)缺血性腦卒中患者血管網(wǎng)絡(luò)的形成發(fā)揮著神經(jīng)保護(hù)作用，丁苯酞與HGF在缺血性腦卒中的相互關(guān)系目前尚無(wú)研究。丁苯酞是否通過(guò)影響HGF表達(dá)發(fā)揮腦保護(hù)作用，改善卒中后神經(jīng)功能缺損癥狀和認(rèn)知功能，這可能作為缺血性腦血管病分子水平上的新的治療靶點(diǎn)，但目前研究報(bào)道尚少。
　　基于此，本研究采用線栓法建立大鼠大腦中動(dòng)脈閉塞(Middle Cerebral ArteryOcclusion，MCAO)

5、的局部腦缺血模型，觀察丁苯酞對(duì)局灶性腦缺血損傷后HGF蛋白表達(dá)的影響。在臨床試驗(yàn)研究中，通過(guò)測(cè)定缺血性腦卒中患者血清HGF含量的動(dòng)態(tài)變化及應(yīng)用丁苯酞后對(duì)其表達(dá)的影響，初步探討丁苯酞是否通過(guò)影響HGF表達(dá)來(lái)促進(jìn)血管網(wǎng)絡(luò)形成從而發(fā)揮腦保護(hù)作用機(jī)制。
　　目的：
　　1.觀察丁苯酞對(duì)腦缺血后大鼠腦組織中HGF表達(dá)的影響;
　　2.觀察丁苯酞對(duì)首發(fā)急性缺血性腦卒中患者認(rèn)知功能及血清HGF的影響;
　　3.觀察丁苯酞對(duì)首發(fā)

6、大腦中動(dòng)脈狹窄或閉塞的急性缺血性腦卒中患者腦血流灌注及血清HGF的影響。
　　方法：
　　1.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、尼莫地平組及丁苯酞組，每組12只。線栓法制作大腦中動(dòng)脈腦缺血再灌注模型，尼莫地平組及丁苯酞組分別應(yīng)用尼莫地平4 mg/kg/day、丁苯酞注射液4.5 mg/kg/day;假手術(shù)組及模型組應(yīng)用同等劑量生理鹽水，各組動(dòng)物按1次厭，連續(xù)14天進(jìn)行腹腔注射給藥。在制模14天后，進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分

7、，梗死體積測(cè)定，HE染色，免疫組織化學(xué)法觀察大腦皮層及海馬神經(jīng)元細(xì)胞中HGF的表達(dá)，Western blot和qPCR法檢測(cè)腦組織中HGF蛋白及基因的表達(dá)量。
　　2.臨床試驗(yàn)中，連續(xù)納入首次發(fā)病的急性缺血性腦卒中患者104例，均為新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科2013年10月至2014年6月連續(xù)住院患者。隨機(jī)分為對(duì)照組54例和治療組50例，登記基線資料，均予以常規(guī)治療，治療組在此基礎(chǔ)上加服丁苯酞軟膠囊。認(rèn)知功能評(píng)定采用北京版蒙特

8、利爾認(rèn)知評(píng)估(MoCA)量表和簡(jiǎn)明智力狀態(tài)檢查(MMSE)量表，血清HGF測(cè)定，分別在治療前及治療后1個(gè)月進(jìn)行。治療1月后，將104例研究對(duì)象看作一個(gè)整體，根據(jù)量表評(píng)定結(jié)果分為認(rèn)知正常組(CN)和認(rèn)知功能損害(VCI)組，因變量為1個(gè)月VCI發(fā)生率，自變量為基線資料，Logistic回歸分析急性缺血性腦卒中后1個(gè)月VCI發(fā)生的危險(xiǎn)因素。
　　3.臨床試驗(yàn)中，連續(xù)納入首次發(fā)病大腦中動(dòng)脈狹窄或閉塞的急性缺血性腦卒中患者45例，均為于新

9、鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科2014年6月至2014年12月連續(xù)住院患者。隨機(jī)分為對(duì)照組24例和治療組21例，登記基線資料，均予以常規(guī)治療，治療組在此基礎(chǔ)上加用丁苯酞注射液。全部患者給予NIHSS評(píng)分、MMSE評(píng)分，檢測(cè)血清HGF水平變化，以及行腦CT灌注檢查，分別在治療前及治療后1個(gè)月進(jìn)行。分析、比較兩組治療前后NIHSS評(píng)分、MMSE評(píng)分、血清HGF及腦CT灌注各參數(shù)的變化，并分析一個(gè)月后HGF濃度與NIHSS、MMSE的相關(guān)性。<

10、br>　　結(jié)果：
　　1.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中:1）丁苯酞治療組大鼠腦缺血后的神經(jīng)功能評(píng)分較模型組及尼莫地平組改善，腦梗死體積有所減小，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）。2）免疫組織化學(xué)染色的檢驗(yàn)方法檢測(cè)對(duì)比后發(fā)現(xiàn):HGF在正常組腦組織中即有表達(dá);模型組較假手術(shù)組大鼠大腦皮層腦缺血邊緣區(qū)域及患側(cè)海馬陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)和光密度值(IOD)明顯下降;尼莫地平組及丁苯酞組HGF陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)率均較模型組顯著上升;丁苯酞組較尼莫地平組明顯升高，差異均有

11、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05），并與Western blot和qRCP檢測(cè)結(jié)果一致。
　　2.臨床試驗(yàn)中:1）急性缺血性腦卒中患者對(duì)照組與治療組治療前及治療后1個(gè)月VCI分別高達(dá)(88％、87％)、卒中后1個(gè)月治療組較對(duì)照組明顯下降，但仍有較高比例(70.4％、64％)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=18.532，P=0.043)。治療后1個(gè)月，治療組總體認(rèn)知功能顯著改善，其中命名、記憶力、注意力和語(yǔ)言能力等認(rèn)知領(lǐng)域改善顯著(z值分別為-2

12、.75、-3.09、-2.63、-2.82，P均＜0.05)。2)兩組患者治療后血清HGF濃度較入院前均有升高趨勢(shì)，且治療組較對(duì)照組升高明顯，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。3)單因素分析顯示:高血壓、嗜酒、中學(xué)及以上、血清HGF濃度、血清Hcy濃度、血清hs-CRP濃度、血清ox-LDL濃度、左側(cè)梗死、梗死體積是VCI的影響因素;多因素Logistic回歸分析顯示:血清Hcy濃度、血清ox-LDL濃度、高血壓是急性缺血性卒中后1個(gè)

13、月VCI的獨(dú)立危險(xiǎn)因素;血清HGF濃度、中學(xué)及以上文化程度為保護(hù)因素。
　　3.臨床試驗(yàn)中:1）45例大腦中動(dòng)脈病變患者治療后1個(gè)月，兩組患者治療后血清HGF濃度較入院前均有升高趨勢(shì)，且治療組較對(duì)照組升高明顯，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);治療組NIHSS評(píng)分、MMSE評(píng)分較對(duì)照組改善顯著(P＜0.05)。1月后同期血清HGF表達(dá)量與同期NIHSS評(píng)分呈負(fù)性相關(guān)，具有中度相關(guān)性（R2=0.685，P＜0.01）;1月后血清H

14、GF表達(dá)量與同期MMSE評(píng)分呈正性相關(guān)，但相關(guān)性較弱（R2=0.172，P＜0.01）。2）治療后1個(gè)月，對(duì)照組和治療組腦梗死中心區(qū)域腦灌注成像rCBV、 rCBF及MTT值均較治療前明顯降低，TTP及Delay值均較治療前升高，與對(duì)照組治療后比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。3）治療后1個(gè)月，治療組腦梗死周圍低灌注腦區(qū)rCBF、rCBV值與治療前比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與對(duì)照組治療后比較明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）;

15、治療組TTP值較治療前降低，且與對(duì)照組治療后比較降低明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.本實(shí)驗(yàn)首次發(fā)現(xiàn)丁苯酞可增加腦缺血后大鼠腦組織中HGF表達(dá)，并確切改善腦神經(jīng)功能損傷預(yù)后;神經(jīng)功能的改善可能與HGF表達(dá)的增加相關(guān);
　　2.本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)丁苯酞可顯著改善急性缺血性卒中患者認(rèn)知功能，其機(jī)制可能與升高血清HGF水平有關(guān);
　　3.本試驗(yàn)首次發(fā)現(xiàn)丁苯酞可以顯著維持腦梗死區(qū)周圍低灌注腦區(qū)血流灌