補(bǔ)陽還五湯指紋圖譜及血清藥物化學(xué)初步研究.pdf

1、補(bǔ)陽還五湯出自《醫(yī)林改錯(cuò)》，由黃芪，當(dāng)歸尾，赤芍，地龍，川芎，桃仁，紅花七種中藥組成。有補(bǔ)氣、活血、通絡(luò)等功效，臨床廣泛用于治療或預(yù)防缺血性腦血管病、冠心病、心肌梗塞及其它血栓栓塞性疾病，是目前治療中風(fēng)等血栓性疾病應(yīng)用頻率最高的方劑，目前補(bǔ)陽還五湯的研究大多集中在其抗腦缺血機(jī)制的研究上，但其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)尚不明確。本文為揭示補(bǔ)陽還五湯的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，以補(bǔ)陽還五湯水煎液為研究對(duì)象，運(yùn)用中藥指紋圖譜技術(shù)與血清藥物化學(xué)研究方法相結(jié)合，建立該方的

2、體內(nèi)外指紋圖譜，探討其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　目的：
　　1.運(yùn)用中藥指紋圖譜技術(shù)，建立補(bǔ)陽還五湯水煎液體外指紋圖譜；
　　2.運(yùn)用中藥血清藥物化學(xué)研究方法，建立補(bǔ)陽還五湯水煎液大鼠灌胃后動(dòng)態(tài)血漿圖譜和血漿特征指紋圖譜；
　　3.通過對(duì)血中移行成分的分析和體內(nèi)外色譜圖比較，探討血漿中藥物移行成分，旨在為揭示補(bǔ)陽還五湯藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提供依據(jù)。
　　方法：
　　1.采用高效液相色譜二極管陣列檢測器，梯度洗脫方式

3、，色譜柱：C18（4.6mm×250mm，5μm），流動(dòng)相：乙腈-0.05％磷酸水溶液梯度洗脫，檢測波長為230nm，流速0.8mL·min-1，柱溫30℃，建立補(bǔ)陽還五湯體外指紋圖譜，并通過比較分析補(bǔ)陽還五湯復(fù)方供試品、單味藥材供試品和藥材陰性供試品圖譜，指認(rèn)歸屬各藥材成分峰。在補(bǔ)陽還五湯水煎液體外指紋圖譜中，通過對(duì)照品比對(duì)，指認(rèn)出5種有效成分并對(duì)其進(jìn)行含量測定；
　　2.補(bǔ)陽還五湯水煎液灌胃SD大鼠，在0、15、30、45、6

4、0、90、120、150、180、240min后，腹腔動(dòng)脈取血漿，分離及預(yù)處理含藥血漿，在相同色譜條件下，建立補(bǔ)陽還五湯動(dòng)態(tài)血漿圖譜和補(bǔ)陽還五湯血漿指紋圖譜。通過比較補(bǔ)陽還五湯水煎液、補(bǔ)陽還五湯水煎液含藥血漿、空白血漿HPLC指紋圖譜，得到大鼠口服補(bǔ)陽還五湯水煎液后，血漿中的原型成分及代謝產(chǎn)物。
　　結(jié)果：
　　1.建立了補(bǔ)陽還五湯水煎液指紋圖譜，通過中藥指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)對(duì)比確定了27個(gè)共有峰，通過峰指認(rèn)，14個(gè)共有峰

5、來源于黃芪；1個(gè)來源于當(dāng)歸和川芎；2個(gè)峰來源于赤芍；2個(gè)來源于紅花；1個(gè)來源于地龍；1個(gè)來源于黃芪和赤芍；4個(gè)峰在七種藥材中都有表現(xiàn)。
　　2.利用補(bǔ)陽還五湯指紋圖譜色譜條件，對(duì)方中5種主要成分進(jìn)行含量測定，羥基紅花黃色素A、芍藥苷、阿魏酸、毛蕊異黃酮苷、芒柄花黃素分別在1.528~7.640μg(r1=0.9996)、0.8000~4.000μg（r2=0.9998）、0.05050~0.2525μg（r3=0.9993）、2.

6、830~14.15μg（r4=0.9999）、1.720~8.600μg（r5=0.9999）范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均加樣回收率依次為97.57%、99.18%、99.59%、96.22%、95.56%。
　　3.口服補(bǔ)陽還五湯水煎液后，通過體內(nèi)外譜圖對(duì)比分析0~240min內(nèi)在大鼠血漿中發(fā)現(xiàn)了30個(gè)入血成分，各成分出現(xiàn)的先后順序及含量存在一定的動(dòng)態(tài)變化。
　　4.口服補(bǔ)陽還五湯水煎液后，在大鼠血漿中發(fā)現(xiàn)了30個(gè)入血成分，其

7、中10個(gè)為血漿固有成分，1個(gè)為溶劑峰，19個(gè)為藥源性成分，其中4個(gè)為藥材原型成分，15個(gè)為代謝產(chǎn)物，其中2個(gè)為黃芪代謝產(chǎn)物，1個(gè)為桃仁代謝產(chǎn)物。
　　結(jié)論：
　　1.本實(shí)驗(yàn)建立的色譜條件簡單、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，通過相似度評(píng)價(jià)，10批補(bǔ)陽還五湯水煎液相似度良好，為補(bǔ)陽還五湯的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供依據(jù)。
　　2.所建立的含量測定方法簡便可行、重復(fù)性好，適用于羥基紅花黃色素A、芍藥苷、阿魏酸、毛蕊異黃酮苷和芒柄花黃素的含量測定，并為補(bǔ)

8、陽還五湯水煎液提供合理、可靠的質(zhì)量控制方法。
　　3.本實(shí)驗(yàn)首次建立了補(bǔ)陽還五湯含藥血漿動(dòng)態(tài)圖譜，并對(duì)血中移行成分進(jìn)行動(dòng)態(tài)追蹤，方法學(xué)考察結(jié)果良好，說明建立的色譜條件具有可行性。大鼠口服補(bǔ)陽還五湯水煎液后，入血成分及移行成分并不是一成不變，隨著時(shí)間的變化，其發(fā)生了量和質(zhì)的變化。
　　4.本實(shí)驗(yàn)首次建立了補(bǔ)陽還五湯含藥血漿指紋圖譜，計(jì)算了5批含藥血漿指紋圖譜的相似度，結(jié)果都在0.8以上，說明建立的色譜條件具有可行性。對(duì)血中移行