麻黃附子細(xì)辛湯抗病毒活性部位及其血清指紋圖譜研究.pdf

1、麻黃附子細(xì)辛湯出自《傷寒論》,由麻黃、炮附子、細(xì)辛組成,用于治療陽(yáng)虛外感寒邪后,引起的發(fā)熱、惡寒甚、脈沉細(xì)、但欲寐的病證。針對(duì)該復(fù)方,本論文實(shí)驗(yàn)研究包含六個(gè)部分:(1)麻黃附子細(xì)辛湯揮發(fā)性成分GC-MS分析分別采用傳統(tǒng)的水蒸氣蒸餾提取揮發(fā)油和頂空進(jìn)樣直接采集揮發(fā)性成分,對(duì)內(nèi)蒙古麻黃、吉林細(xì)辛中的揮發(fā)性成分進(jìn)行GC/MS分析。2種樣品采集方法,分別提供了麻黃、細(xì)辛中不同沸點(diǎn)的揮發(fā)物的化學(xué)信息;運(yùn)用這2種方法可以建立更全面的麻黃、細(xì)辛揮發(fā)性

2、成分GC-MS表征體系。將麻黃附子細(xì)辛湯按照處方比例,提取揮發(fā)油后進(jìn)行GC-MS分析,分析結(jié)果與麻黃、細(xì)辛藥材單獨(dú)提取的揮發(fā)油比較,發(fā)現(xiàn)麻黃附子細(xì)辛湯總離子流圖化學(xué)信號(hào)主要來(lái)源于細(xì)辛,同時(shí)發(fā)現(xiàn)單味藥材的一些化學(xué)信號(hào)在復(fù)方揮發(fā)油中未檢出,為其配伍機(jī)理及藥效基礎(chǔ)提供一定依據(jù)。(2)麻黃附子細(xì)辛湯提取工藝的優(yōu)選采用高效液相色譜指紋圖譜技術(shù),以麻黃堿、新烏頭堿、次烏頭堿含量、高效液相色譜(HPLC)指紋圖譜特征峰總面積以及干浸膏得率為綜合評(píng)判指

3、標(biāo),通過L9(3)4正交試驗(yàn)設(shè)計(jì),考察水用量、提取溫度、提取時(shí)間和提取次數(shù)等因素對(duì)提取工藝的影響。最佳工藝條件為加16倍量水90℃提取3,每次1h。(3)大孔樹脂對(duì)麻黃附子細(xì)辛湯的分離純化選擇4種不同極性的大孔吸附樹脂,以麻黃堿為指標(biāo),采用高效液相色譜法測(cè)定,通過靜態(tài)吸附、靜態(tài)解吸附、動(dòng)態(tài)解吸附試驗(yàn)初步優(yōu)選純化麻黃附子細(xì)辛湯的最佳樹脂。結(jié)果D-101型樹脂能夠有效富集麻黃附子細(xì)辛湯中的麻黃堿,適用于該復(fù)方提取液的純化。(4)麻黃附子細(xì)辛

4、湯大孔樹脂柱不同洗脫部位指紋圖譜研究按照優(yōu)化提取工藝提取麻黃附子細(xì)辛湯。提取液經(jīng)D101大孔吸附樹脂柱分離得到30％、50%、70%、95%乙醇洗脫部位,測(cè)定其HPLC指紋圖譜及麻黃堿和烏頭類生物堿的含量,發(fā)現(xiàn)洗脫部位的組分主要集中在30%乙醇洗脫部位。(5)麻黃附子細(xì)辛湯不同提取部位給藥血清HPLC指紋圖譜研究測(cè)定經(jīng)大孔樹脂分離、純化的麻黃附子細(xì)辛湯4個(gè)部位給藥血清的HPLC指紋圖譜,結(jié)果發(fā)現(xiàn)WE30組在給藥后30min血清成分變化達(dá)

5、到極大值,之后在240min處有一血藥濃度峰值;WE50組在給藥后30min血清成分變化達(dá)到極大值,于180min處有一血藥濃度峰值。(6)麻黃附子細(xì)辛湯抗病毒活性研究分別采集麻黃、細(xì)辛單味藥材及復(fù)方揮發(fā)油,制備水提液大孔樹脂柱不同洗脫部位進(jìn)行體外抗病毒實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)大孔樹脂柱50%和70%乙醇洗脫物對(duì)RSV的抑毒指數(shù)為4、對(duì)FluA的抑毒指數(shù)為2-4,具有較低的抑毒活性;提取物對(duì)于HSV效果顯著,30%、50%、70%、95%乙醇

6、洗脫物對(duì)HSV的抑毒指數(shù)分別為16、16、32、32。本論文通過指紋圖譜特征峰信息與指標(biāo)成分相結(jié)合,優(yōu)化麻黃附子細(xì)辛湯的提取工藝;通過抗病毒體外實(shí)驗(yàn),初步篩選了麻黃附子細(xì)辛湯抗病毒活性部位,為中藥抗病毒活性復(fù)方的研發(fā)提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。同時(shí),本論文結(jié)合HPLC指紋圖譜特征峰的信息反映不同提取部位入血成分的變化規(guī)律,充分體現(xiàn)了中藥多成分協(xié)同作用的整體性特點(diǎn)。本論文的研究,為建立一種可以全面的反映中藥復(fù)方多成分整體作用特點(diǎn)的提取純化及體內(nèi)吸收代