骨髓間質(zhì)干細(xì)胞創(chuàng)面移植促進(jìn)深層皮膚組織損傷再生.pdf

1、目的：明確瘢痕愈合/再生修復(fù)與皮膚損傷深度之間的關(guān)系；研究骨髓間質(zhì)干細(xì)胞創(chuàng)面局部移植能否使更深層次的組織損傷再生修復(fù)，以及相關(guān)的細(xì)胞、分子機(jī)制。
　　方法：在SD大鼠背部建立連續(xù)性、漸進(jìn)性加深創(chuàng)面，取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的第三代SD大鼠BM-MSCs/GFP，以PBS稀釋成1.0×106/300.0μL的細(xì)胞懸液，其中，200.0μL均勻注射于創(chuàng)緣皮內(nèi)，100.0μL注射于創(chuàng)面淺層，對(duì)照組以相同方法注射同等劑量的PBS液，于移植后第1、3

2、、5、7、14、21天照相后取材，行快速冰凍組織病理切片，觀察BM-MSCs/GFP移植后不同時(shí)間點(diǎn)在創(chuàng)面的數(shù)量、分布情況；行HE、Masson染色，確定創(chuàng)面再生的最深組織層次，并根據(jù)免疫組織化學(xué)染色，觀察Blimp1+、Lgr6+干細(xì)胞在創(chuàng)面的數(shù)量和VEGF的表達(dá)差異，初步探討相關(guān)的細(xì)胞分子機(jī)制。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用x±s表示，各時(shí)間點(diǎn)創(chuàng)面收縮率、創(chuàng)面愈合率、創(chuàng)面BM-MSCs/GFP計(jì)數(shù)和免疫組化陽(yáng)性著色細(xì)胞比例用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件

3、兩因素方差分析；毛細(xì)血管計(jì)數(shù)用Dunnet t檢驗(yàn)；創(chuàng)面再生組織層次用Χ2檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理；P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：⑴對(duì)照組毛囊漏斗頂部以上平面的組織損傷再生修復(fù)；BM-MSCs/GFP創(chuàng)面局部移植后組織再生層次加深至毛囊皮脂腺開(kāi)口平面以上。⑵BM-MSCs/GFP移植后隨時(shí)間延長(zhǎng)而減少，移植后21日，細(xì)胞數(shù)量約為移植后首日的1.0％。⑶BM-MSCs/GFP創(chuàng)面局部移植后隨時(shí)間延長(zhǎng)向創(chuàng)面深層遷徙，皮脂腺、血

4、管壁等部位早期有散在分布，21日后消失。⑷Blimp1+、Lgr6+干細(xì)胞在移植后第3、5日分別增加，BM-MSCs/GFP組顯著高于對(duì)照組（P<0.05），至移植后21日兩組無(wú)明顯差異。5、VEGF表達(dá)量在BM-MSCs/GFP移植后第1日開(kāi)始上升，第5日達(dá)到高峰，14日開(kāi)始下降，BM-MSCs/GFP組表達(dá)量顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。6、BM-MSCs/GFP治療組每高倍視野毛細(xì)血管數(shù)為5.0±0.3，高于對(duì)照組的2.5±0.