托滅酸對人胃癌AGS細(xì)胞增殖與凋亡的影響.pdf

1、背景:托滅酸(Tolfenamic acid，2-[(3-氯-2-甲基苯基)氨基]苯甲酸）是一種新型的非甾體類抗炎藥，其作用機(jī)理是通過抑制環(huán)氧合酶的產(chǎn)生而發(fā)揮解熱鎮(zhèn)痛的作用，目前臨床上主要應(yīng)用于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、偏頭痛等疾病的治療。近年來，國內(nèi)外學(xué)者對此進(jìn)行了多方面的研究，發(fā)現(xiàn)托滅酸在抑制腫瘤細(xì)胞生長、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、干擾細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、調(diào)節(jié)原癌基因與抑癌基因活性、抑制腫瘤血管形成等也發(fā)揮重要作用，對胰腺癌、食管癌、結(jié)直腸癌等消化系統(tǒng)惡性腫瘤都

2、顯示出抑制作用，但尚未報(bào)道托滅酸對胃癌的抗腫瘤活性，本課題旨在利用流式細(xì)胞術(shù)檢測AGS細(xì)胞凋亡率、MTT法檢測細(xì)胞增殖情況、Western Blotting法檢測Bcl-2與Bax蛋白相對表達(dá)量等手段初步探索托滅酸對胃癌AGS細(xì)胞的抗腫瘤作用。
　　目的:研究托滅酸對胃癌AGS細(xì)胞的抗腫瘤效果及其機(jī)制。
　　方法:
　　1.通過AnnexinⅤ FITC/PI雙染色，流式細(xì)胞術(shù)檢測探討托滅酸對胃癌AGS細(xì)胞凋亡率的影響

3、;
　　2.通過MTT法測試不同濃度、不同時(shí)間托滅酸對胃癌AGS細(xì)胞生長的影響，并繪制生長曲線圖;
　　3.通過Hochest33258核染色檢測托滅酸對AGS細(xì)胞凋亡的影響，并與對照組對比，在熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞凋亡的差異;
　　4.通過Western Blotting法檢測托滅酸作用下凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax相對表達(dá)量及Bcl-2/Bax比值。
　　結(jié)果：
　　1.陰性對照組、50μ mol/L、

4、100μmol/L、200μ mol/L托滅酸組作用24小時(shí)后行流式細(xì)胞術(shù)檢測凋亡率(％)分別為15.32±2.26、29.87±4.76、54.82±4.49、72.13±5.53。與對照組相比，托滅酸不同濃度的處理組對胃癌細(xì)胞的促凋亡作用明顯增加，并且凋亡率隨著藥物濃度梯度的增高而增高。
　　2.胃癌AGS細(xì)胞經(jīng)50μ mol/L、100μ mol/L、200μmol/L托滅酸處理后24h、48h、72h后，MTT法檢測提示與

5、陰性對照組對比，細(xì)胞增殖能力受到明顯抑制，并且隨著藥物濃度的增大，抑制能力也增強(qiáng)。
　　3.對照組凋亡細(xì)胞數(shù)為2.32±0.54，托滅酸組為9.17±1.38，P＜0.05。與對照組相比，托滅酸組細(xì)胞在托滅酸作用24小時(shí)后，Hoechst33258染料核染色顯示，濃染與碎裂細(xì)胞明顯增多。
　　4.通過Western Blotting法檢測50μ mol/L、100μ mol/L、200μ mol/L托滅酸處理后AGS細(xì)胞Bc

6、l-2與Bax蛋白相對表達(dá)量，其中Bcl-2分別為1.42±0.11、0.95±0.14、0.63±0.08，Bax蛋白分別為0.28±0.03、0.57±0.05、0.86±0.09，P＜0.05，可以看出隨著藥物濃度的增加，Bcl-2/Bax蛋白比例減少。
　　結(jié)論：
　　1.托滅酸可通過抑制胃癌AGS細(xì)胞生長增殖和促進(jìn)細(xì)胞凋亡以達(dá)到抗腫瘤的作用。
　　2.托滅酸促進(jìn)胃癌AGS細(xì)胞凋亡的作用與Bcl-2蛋白表達(dá)的降