鄂爾多斯高原甘草中產(chǎn)甘草酸內(nèi)生真菌的分離與發(fā)酵培養(yǎng).pdf

1、植物內(nèi)生真菌(Endophytic fungi)是一大類普遍存在但未被充分研究利用的微生物特殊類群。泛指那些生活在健康的植物體內(nèi)不引起任何病害癥狀的所有真菌。它們主要生長在植物的根、莖、葉等器官組織當(dāng)中，在植物體內(nèi)形成相對穩(wěn)定的真菌菌群。藥用植物中的內(nèi)生真菌具有豐富的多樣性，可以產(chǎn)生與宿主相同在醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)、工業(yè)等行業(yè)有重要應(yīng)用價值的活性物質(zhì)。利用內(nèi)生真菌發(fā)酵實現(xiàn)生物活性物質(zhì)的工業(yè)化生產(chǎn)，可以提高產(chǎn)量、降低產(chǎn)品成本，成為當(dāng)前藥物研究的一個

2、熱點。
　　本研究從鄂爾多斯高原甘草根部中分離純化出37株甘草內(nèi)生真菌，通過HPLC、LC-MS等方法篩選出4株產(chǎn)甘草酸的菌株，同時對株菌B12的發(fā)酵培養(yǎng)條件進行了優(yōu)化，實驗結(jié)果概括如下：
　　(1)對甘草根部表面消毒方法進行選擇，得出比較理想的滅菌實驗條件為先用75％乙醇中浸泡30s，無菌水沖洗4次，然后用3％H2O2溶液處理3min，無菌水沖冼4次，每次5min。再用0.1％升汞處理1min，無菌水沖洗4次。基本達到了既

3、要徹底殺滅材料表面的附生雜菌，同時又不影響內(nèi)部真菌的分離的要求。
　　(2)共分離得到甘草內(nèi)生真菌37株，經(jīng)初步鑒定，本次分離的真菌跨真菌的2目、3科、6屬，它們分別屬于鐮孢霉屬(Fusarium)、青霉屬(Penicillium)、擬青霉屬(Penicilliopsis)、曲霉屬(Aspergillus)、鏈格孢屬(Alternaria)、木霉屬(richoderma)。說明根際土壤中微生物豐富，可能是大部分內(nèi)生真菌的主要來源。

4、
　　(3)對所分離的甘草酸內(nèi)生真菌菌株首先進行了 HPLC篩選，有四株真菌 B6、B12、B17和B23的次生代謝產(chǎn)物可能為甘草酸類物質(zhì)，由LC-MS進一步鑒定，菌株 B12基本確定能產(chǎn)生甘草酸，產(chǎn)量為346.1μg/L，和已報道的甘草酸產(chǎn)生真菌相比，該菌株產(chǎn)量較高。菌株B12經(jīng)過形態(tài)學(xué)特性研究分析，初步鑒定該菌株為鐮孢霉屬。
　　(4)以菌株生長所積累的菌絲體干重為指標，通過選擇了基本培養(yǎng)基類型、培養(yǎng)集中的碳源種類、氮源