接近零級釋放的促紅細胞生成素長效緩釋微球制劑的研究.pdf

1、重組促紅細胞生成素（EPO）是一種多效細胞因子，對于腎衰性貧血、心衰性供氧不足、缺血造成的心臟損傷等具有治療或修復(fù)作用。長效緩釋注射能夠降低EPO的注射頻率以及降低EPO的血藥濃度峰值，但也面臨著EPO聚集、變性、產(chǎn)生有害免疫反應(yīng)以及緩釋制劑失敗造成嚴重突釋的困難。過去數(shù)十年來，
　　EPO的長效緩釋微球劑型的研究曾多有報道，但上述問題沒有得到克服，相關(guān)產(chǎn)品至今沒有問世。針對蛋白藥物極其脆弱易變的高級結(jié)構(gòu)，本實驗室開發(fā)了一系列針對

2、生物大分子的藥物輸送系統(tǒng)，諸如水相－水相乳化蛋白預(yù)處理法、膜乳化沉降微球制備法、相導(dǎo)向蛋白微包封法等一系列新穎而實用的技術(shù)，全面而系統(tǒng)地解決了上述難題。EPO的緩釋制劑涉及到對EPO自然構(gòu)象的保護、有害抗體的預(yù)防、以及EPO的突釋現(xiàn)象的解決。本課題在實驗室已有的微球制劑的基礎(chǔ)上，針對EPO治療心衰性供氧不足這一新適應(yīng)癥，開發(fā)了接近零級釋放的微球制劑，保護蛋白藥物的自然形態(tài)的同時，維持體內(nèi)體外小劑量恒定釋放的要求。
　　本研究首先采

3、用高效液相色譜法考察了EPO在檸檬酸緩沖液中的穩(wěn)定性，檢測了EPO檸檬酸緩沖液在不同時間不同溫度條件下的含量變化，確定了pH6.8的檸檬酸緩沖液可以作為EPO的釋放介質(zhì)，且至少保存EPO達半個月之久。接下來進行EPO微球制劑的處方摸索。先利用低溫冷凍相分離法制備了蛋白多糖顆粒來保護蛋白，防止其在包封或者釋放過程中變性失活。再將EPO蛋白多糖顆粒包封進PLGA微球中，通過調(diào)節(jié)微球制備材料的分子量以及釋放添加劑的含量，篩選出擁有最佳體外釋放

4、曲線的處方。EPO微球制劑的處方確定后，采用SPG膜乳化沉降法制備微球，考察了不同壓力不同膜孔徑下制備的微球粒徑大小及均一性，優(yōu)化了SPG膜乳化法的制備工藝，提高微球粒徑均一性，排除小粒徑的微球?qū)︶尫判袨榈母蓴_。此外，我們采取了分段控釋技術(shù)解決微球三段式釋放的問題，即對于前期的突釋，采用回溫實驗，利用PLGA的自身修復(fù)功能關(guān)閉微球表面孔洞，減少表面藥物殘留而引起的突釋。對于后期釋放不完全的特點，通過添加釋放調(diào)節(jié)劑氫氧化鎂并調(diào)節(jié)其含量來獲