miR-370調(diào)控TβR2在肝臟缺血再灌注損傷和缺血預(yù)處理中的機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　通過(guò)制備小鼠肝臟缺血再灌注損傷 miR-370表達(dá)干預(yù)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，闡明 miR-370表達(dá)抑制和表達(dá)增強(qiáng)對(duì)肝臟缺血再灌注損傷和缺血預(yù)處理的作用，揭示 miR-370是否為肝臟缺血再灌注損傷時(shí)調(diào)節(jié) TβR2表達(dá)的關(guān)鍵因子，以及miRNA及其對(duì) TGF-β/Smad信號(hào)通路的調(diào)控機(jī)制。為肝臟缺血再灌注損傷的防治及保護(hù)提供進(jìn)一步的策略。
　　方法：
　　（1）、小鼠肝臟缺血再灌注損傷 miR-370表達(dá)增強(qiáng)和

2、表達(dá)抑制的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)干預(yù)模型的建立；
　?。?）、小鼠肝臟缺血再灌注損傷 miR-370表達(dá)干預(yù)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒⒌幕A(chǔ)上，通過(guò)組織病理學(xué)石蠟切片 HE染色和血清肝功能酶譜分析探討觀察miR-370表達(dá)變化對(duì)小鼠肝臟缺血再灌注損傷及 miR-370表達(dá)變化對(duì)小鼠肝臟缺血預(yù)處理的影響；
　?。?）、小鼠肝臟缺血再灌注損傷 miR-370表達(dá)干預(yù)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒⒌幕A(chǔ)上，采用定時(shí)定量 PCR法（real time PCR），免疫

3、組化以及蛋白免疫印跡法（Western blot）等方法在 mRNA水平和蛋白水平觀察 miR-370表達(dá)抑制或增強(qiáng)后，miR-370的靶標(biāo) TβR2的表達(dá)變化情況，進(jìn)一步檢測(cè) TGF-β/Smad信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。
　　結(jié)果：
　?。?）、小鼠肝臟缺血再灌注損傷組中miR-370的表達(dá)水平比假手術(shù)對(duì)照組高了2.57倍。同時(shí)，肝臟缺血預(yù)處理組的miR-370的表達(dá)水平比缺血再灌注損傷組降低了49.28％（P<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)

4、學(xué)意義）。
　?。?）、抑制 miR-370可以減輕肝臟缺血再灌注損傷。在使用 miR-370 mimics后小鼠 miR-370的表達(dá)水平相比基因空白序列對(duì)照組提升了，而 miR-370 inhibitor后下降了。miR-370 inhibitor組的血清 ALT酶的水平較基因序列空白對(duì)照組降低了37.39%，血清 AST的水平較基因序列空白對(duì)照組降低了49.27%（P<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義）。使用 miR-370 in

5、hibitor后，小鼠的肝臟病理組織學(xué)評(píng)分也顯著下降了。相比之下，基因序列空白對(duì)照組沒(méi)有改善小鼠病理組織學(xué)損傷。
　　（3）、抑制 miR-370能夠減輕小鼠肝臟缺血再灌注損傷的促炎癥細(xì)胞因子。肝臟缺血再灌注損傷組和假手術(shù)對(duì)照組相比，TNF-a和 IL-β表達(dá)水平明顯上升了。缺血預(yù)處理組和缺血再灌注損傷組相比，TNF-a和 IL-β都有所下降。
　　（4）、miR-370為肝臟缺血再灌注損傷時(shí)調(diào)節(jié) TβR2表達(dá)的關(guān)鍵因子。m

6、iR-370直接靶向調(diào)控3’端非翻譯轉(zhuǎn)換區(qū)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子βII型受體（transforming growth factor，beta receptor2，TGFBR2或者TβR2）。采用 miR-370 mimics，空白序列對(duì)照以及 miR-370 inhibitor轉(zhuǎn)染細(xì)胞，結(jié)果顯示，miR-370 mimics組轉(zhuǎn)染48小時(shí)后在 TβR2的mRNA表達(dá)水平下降了。相對(duì)的，miR-370 inhibitor組則增加了。同時(shí)，miR-3

7、70 inhibitor組和基因序列空白對(duì)照組相比 TβR2的mRNA表達(dá)水平增加了。伴隨著 TβR2表達(dá)的增加，其下游靶分子磷酸化 Smad的表達(dá)水平在 miR-370 mimics組比基因序列空白對(duì)照組提高了。表明了下調(diào) miR-370可以激活 TGF-β/Smad信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。
　　結(jié)論：
　　miR-370可能是肝臟缺血再灌注損傷損傷和肝臟缺血預(yù)處理保護(hù)機(jī)制中的關(guān)鍵因子之一，miR-370在肝臟缺血再灌注損傷中具有一