苦參鎮(zhèn)靜安神有效成分的分離及藥效研究.pdf

1、目的：苦參主要含有生物堿和黃酮兩大類化學(xué)成分。目前，國內(nèi)外對苦參的研究比較多，但大多集中在生物堿類成分，苦參黃酮類成分的研究較少。經(jīng)前期研究證實，苦參堿和苦參醇提物具有鎮(zhèn)靜安神作用，從苦參安神有效部位中分離得到苦參堿和氧化苦參堿等生物堿，以及黃酮類成分和其它類成分。目前關(guān)于苦參黃酮類成分的鎮(zhèn)靜安神作用還未見有報道，本實驗以苦參中的黃酮類成分為研究對象，提取分離苦參鎮(zhèn)靜安神作用有效成分中的黃酮類成分，研究其對中樞神經(jīng)的作用，進一步闡述苦參

2、的鎮(zhèn)靜安神作用。
　　方法：本實驗采用系統(tǒng)溶劑對苦參進行提取分離;通過翻正反射法初步篩選出苦參中鎮(zhèn)靜安神有效部位;通過對苦參堿、氧化苦參堿以及黃酮類成分的展開劑和顯色劑的對比觀察，確立了苦參薄層色譜的檢測條件，并且對苦參二氯甲烷鎮(zhèn)靜安神有效部位中的苦參堿、氧化苦參堿和黃酮類成分進行了檢測;對苦參黃酮類成分的HPLC檢測條件進行探索，在流動相的選擇上分別考察了甲醇-水、乙腈-0.2％甲酸水溶液，在檢測波長分別對280nm、320nm

3、、360nm進行了篩選，并且建立了苦參各萃取部位的黃酮類成分色譜圖;基于高效逆流色譜技術(shù)，對兩項溶劑系統(tǒng)、流速、轉(zhuǎn)速、實驗溫度分別進行考察，優(yōu)化色譜條件，建立操作簡便、穩(wěn)定可重復(fù)的苦參提取物中黃酮類成分的分離方法，制備黃酮類成分;采用細胞實驗對于苦參黃酮類成分的海馬神經(jīng)細胞作用進行研究。
　　結(jié)果：通過系統(tǒng)溶劑對苦參進行萃取得到苦參沉淀物（苦參1號）、苦參水提液二氯甲烷萃取物（苦參2號）、苦參水提液乙酸乙酯萃取物（苦參3號）、苦參

4、水提物（苦參4號）、苦參醇提液二氯甲烷萃取物（苦參5號）、苦參醇提液乙酸乙酯萃取物（苦參6號）、苦參醇提物（苦參7號）;經(jīng)整體動物實驗篩選得到苦參提取物中鎮(zhèn)靜安神有效部位（P＜0.01），即為醇提二氯甲烷萃取部位（苦參5號）;確立了苦參堿、氧化苦參堿薄層色譜的檢測條件，展開劑為二氯甲烷-甲醇-濃氨水(5∶0.6∶0.3)，顯色劑為碘化鉍鉀試液和亞硝酸鈉乙醇試液，能顯示持久的橙色斑點;確立了黃酮類成分的薄層色譜檢測條件，展開劑為石油醚-乙

5、酸乙酯-甲醇溶液，顯色劑為三氯化鋁乙醇溶液，置紫外光(365nm)下能觀察到清晰的斑點，并且檢測到了苦參二氯甲烷鎮(zhèn)靜安神活性部位中的苦參堿、氧化苦參堿和黃酮類成分;建立了苦參黃酮類成分高效液相色譜方法，通過考察確立了乙腈-0.2％甲酸水為流動相，360nm為苦參黃酮類成分的檢測波長，并且建立了苦參各萃取部位中黃酮類成分的色譜圖;通過對苦參黃酮類成分的高速逆流色譜條件的研究，確定流動相為石油醚∶乙酸乙酯∶甲醇∶水(1∶1∶1∶1)，轉(zhuǎn)速：

6、800r/min，流速：3ml/min，溫度：25℃，檢測波長365nm，采用高速逆流色譜分離得到2個單體成分以及多個組分，經(jīng)黃酮薄層色譜法檢測鑒定為苦參黃酮類組分（1-5號）;通過細胞實驗證實苦參黃酮類組分3號與空白組比較有非常顯著性差異(P＜0.01)，實驗證明苦參黃酮類成分具有抑制海馬神經(jīng)細胞活性的作用。
　　結(jié)論：本實驗通過整體動物實驗證實苦參醇提二氯甲烷部位是苦參鎮(zhèn)靜安神有效部位;采用高速逆流色譜技術(shù)對其鎮(zhèn)靜安神有效部位