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文檔簡介
1、目的:Apelin、ELABELA多肽是APJ受體的內源性配體,本課題擬探討apelin亞型apelin-12、apelin-13、apelin-17、apelin-36及ELABELA對兔血小板聚集的影響,研究Pannexin1(Panx1)半通道蛋白-P2X7途徑是否介導apelin-12、apelin-17、apelin-36、ELABELA促血小板聚集作用,自噬途徑是否介導apelin-13抑制兔血小板聚集的作用,發(fā)現(xiàn)Apeli
2、n亞型、ELABELA新生物學作用,為闡明血栓性疾病發(fā)生機理提供新的理論依據(jù)和藥物篩選靶點。
方法:
1、比濁法測定兔富血小板血漿血小板聚集;
2、Western blot檢測相關蛋白表達。
結果:
1、Apelin-12(1*10-7~1.0μM)濃度依賴性促進兔血小板聚集,其達峰濃度是51.5±6.6(%),半數(shù)有效濃度(median effective concertration,
3、EC50)為0.03981*10-3μM,達峰時間為36.3±15.6(s),達峰速率為3.9±1.4(%/s);
2、Apelin-17(1*10-9~0.01μM)呈濃度依賴性地促進兔血小板聚集,達峰濃度是50.1±4.5(%),半數(shù)有效濃度(EC50)為0.0014*10-3μM,26.1±7.1,達峰速率為2.9±0.9(%/s);
3、Apelin-36(1*10-7~1.0μM)濃度依賴性地促進兔血小板聚
4、集,達峰濃度是45.8±2.6(%),半數(shù)有效濃度(EC50)為0.18*10-3μM,達峰時間為22.9±6.8(s),達峰速率為3.1±0.8(%/s);
4、ELABELA(0.001~1.0μM)濃度依賴性促進兔血小板聚集,其達峰濃度是46.7±0.8(%),半數(shù)有效濃度(EC50)為0.028μM,達峰時間為31.7±13.8(s),達峰速率為3.6±1.1(%/s);
5、Apelin-13(0.001~
5、1.0μM)濃度依賴性抑制ADP誘導的兔血小板聚集,半數(shù)抑制濃度(IC50)為0.0219μM;而apelin-13對膠原(collagen)、凝血酶(thrombin)和花生四烯酸(AA)誘導的兔血小板聚集沒有抑制作用;
6、Apelin-12促進ADP和thrombin誘導血小板聚集,不影響collagen和AA誘導的兔血小板聚集。
7、Apelin-17對ADP、collagen和AA誘導的兔血小板聚集沒有促進
6、作用,但促進thrombin誘導的兔血小板聚集。
8、Apelin-36對ADP、collagen、thrombin、AA誘導的兔血小板聚集沒有影響。
9、ELABELA促進ADP、collagen、AA誘導的兔血小板聚集,對thrombin誘導的兔血小板聚集沒有影響
10、APJ受體阻斷劑F13A減弱apelin-12、apelin-17、apelin-36、ELABELA誘導的兔血小板聚集;F13A減弱
7、apelin-13抑制兔血小板聚集作用;
11、Pannexin1抑制劑丙磺舒(Probenecid,Prb)和生胃酮(Carbenoxolone,Cbx)抑制apelin-12、apelin-17、apelin-36和ELABELA誘導的兔血小板聚集;
12、P2X7抑制劑亮藍(Brilliant blue G,BBG)抑制apelin-12、apelin-17、apelin-36和ELABELA誘導的兔血小板聚集
8、;
13、自噬誘導劑雷帕霉素(rapamycin,Rapa)減弱apelin-13對兔血小板聚集的抑制作用,而自噬抑制劑3MA增強apelin-13的抑制作用;同時,rapamycin促進ADP誘導的兔血小板聚集,3MA抑制ADP誘導的兔血小板聚集;
14、Apelin-13不能阻斷apelin-12、apelin-17、apelin-36單獨或組合時誘導的兔血小板聚集。
結論:
1、Apelin
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