6-姜烯酚通過(guò)NF-κB途徑對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的急性肺損傷小鼠的保護(hù)作用機(jī)制研究.pdf

1、本文從以下幾部分進(jìn)行論述：
　　第一部分 6-姜烯酚對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的急性肺損傷小鼠肺泡毛細(xì)血管通透性的影響
　　目的：
　　研究6-姜烯酚(6-shogoal，6-SH)對(duì)脂多糖(Lipopolysac-charide，LPS)誘導(dǎo)的急性肺損傷(Acute Lung Injury, ALI)小鼠肺泡毛細(xì)血管通透性的影響。
　　方法：
　　健康雄性小鼠72只，隨機(jī)分為6組(n=12)，LPS或NS滴入后6h，頸

2、動(dòng)脈放血處死動(dòng)物。檢測(cè)每組動(dòng)物支氣管肺泡灌洗液(BALF)中總細(xì)胞數(shù)，中性粒細(xì)胞百分比，白蛋白濃度，檢測(cè)肺組織濕重與干重比(W/D)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，實(shí)驗(yàn)組之間的比較采用Dunnet T檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，p≤0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，數(shù)據(jù)處理采用SPSS17.0。
　　結(jié)果：
　　(1)BALF總細(xì)胞數(shù):Dunnett方差分析顯示，與NS相比，L組BALF總細(xì)胞數(shù)增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01

3、)，與L組相比，6-SH組和DEX組BALF中總細(xì)胞數(shù)降低(p＜0.01)。
　　(2)BALF中性粒細(xì)胞數(shù)百分比:與NS組比較，L組BALF中性粒細(xì)胞數(shù)百分比升高(p＜0.01);與L組比較，6-SH組和DEX組BALF中中性粒細(xì)胞數(shù)百分比降低(p＜0.01);
　　(3)BALF白蛋白濃度:與NS組比較，L組BALF白蛋白濃度升高(P＜0.01);與L組比較，6-SH組和DEX組BALF中白蛋白濃度降低(p＜0.01)，

4、差異有顯著性。
　　(4)W/D:與NS組比較，L組肺組織W/D升高(P＜0.01);與L組比較，6-SH組和DEX組W/D降低(P＜0.01)。
　　結(jié)論：
　　6-姜烯酚能夠減輕LPS誘導(dǎo)的ALI，其部分機(jī)制可能與抑制中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)、降低肺泡毛細(xì)血管通透性、減輕肺水腫有關(guān)，其效果與激素的抗炎作用相似。
　　第二部分 6-姜烯酚對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的急性肺損傷小鼠肺泡灌洗液炎癥因子的影響
　　目的：
　　研

5、究6-姜烯酚對(duì)脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)誘導(dǎo)急性肺損傷(Acute Lung Injury, ALI)小鼠肺泡灌洗液炎癥因子的影響。
　　方法：
　　健康雄性小鼠72只，隨機(jī)分為6組(n=12)，LPS或NS滴入后6h，頸動(dòng)脈放血處死動(dòng)物。每組動(dòng)物檢測(cè)支氣管肺泡灌洗液(BALF)中白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)、腫瘤壞死因子-a(TNF-a)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)的濃度。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)

6、差表示，實(shí)驗(yàn)組之間的比較采用Dunnet T檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，p≤0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，數(shù)據(jù)處理采用SPSS17.0。
　　結(jié)果：
　　(1)TNF-a:與NS組比較，L組肺組織TNF-a濃度升高(P＜0.01);與L組相比，6-SH組和DEX組肺組織TNF-a濃度降低(P＜0.01)。
　　(2)IL-1β:與NS組比較，L組肺組織IL-1β濃度升高(P＜0.01);與L組相比，6-SH組和DEX組

7、肺組織IL-1β濃度降低(P＜0.01)。
　　(3)IL-6:與NS組比較，L組肺組織IL-6濃度升高(P＜0.01);與L組相比，6-SH組和DEX組肺組織IL-6濃度降低(P＜0.01)。
　　結(jié)論：
　　6-姜烯酚能夠抑制LPS誘導(dǎo)的ALI小鼠肺泡灌洗液中TNF-a、IL-1β、IL-6濃度，其肺保護(hù)作用可能與抑制炎癥因子有關(guān)。
　　第三部分 6-姜烯酚對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的急性肺損傷小鼠肺組織髓過(guò)氧化物酶(MP

8、O)活性及肺組織病理學(xué)變化的影響
　　目的：
　　研究6-姜烯酚對(duì)脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)誘導(dǎo)的急性肺損傷(Acute Lung Injury, ALI)小鼠肺組織髓過(guò)氧化物酶(MPO)活性及肺組織病理學(xué)變化的的影響。
　　方法：
　　健康雄性小鼠72只，隨機(jī)分為6組(n=12)，LPS或NS滴入后6h，頸動(dòng)脈放血處死動(dòng)物。取部分肺組織進(jìn)行病理切片染色，其余肺組織用來(lái)檢測(cè)肺組織勻漿中

9、髓過(guò)氧化物酶(MPO)活性，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，實(shí)驗(yàn)組之間的比較采用Dunnet T檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，p≤0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，數(shù)據(jù)處理采用SPSS17.0。
　　結(jié)果：
　　病理所見(jiàn):生理鹽水對(duì)照組表現(xiàn)為小鼠肺組織結(jié)構(gòu)正常，細(xì)胞完整，肺泡腔清晰可見(jiàn)，肺泡間隔未見(jiàn)水腫及炎細(xì)胞浸潤(rùn)。L組出現(xiàn)的肺損傷改變明顯:包括肺泡結(jié)構(gòu)破壞、細(xì)胞破壞、肺泡壁嚴(yán)重水腫、肺間質(zhì)部分增厚、肺泡腔滲出增多，大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、

10、血管充血、出血。6-SH組和DEX組，均有不同程度的肺損傷，但較L組損傷減輕，其肺泡組織結(jié)構(gòu)尚可，肺間質(zhì)和肺泡腔內(nèi)滲出物較L組明顯減少，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)現(xiàn)象亦減輕。MPO:與NS組比較，L組肺組織MPO活性升高(P＜0.01);與L組相比，6-SH組和DEX組肺組織MPO活性降低(P＜0.01)。
　　結(jié)論：
　　1、組織病理學(xué)檢查證實(shí):6-姜烯酚能夠改善病理狀態(tài)下的肺組織，且成劑量依賴性。
　　2、6-姜烯酚的肺組織保護(hù)

11、作用可能與抑制MPO活性相關(guān)。
　　第四部分 6-姜烯酚對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的急性肺損傷小鼠肺組織NF-κB信號(hào)通路的抑制作用
　　目的：
　　研究6-姜烯酚對(duì)脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)誘導(dǎo)的急性肺損傷(Acute Lung Injury, ALI)小鼠肺組織NF-κB信號(hào)通路的影響。
　　方法：
　　健康雄性小鼠72只，隨機(jī)分為6組(n=12)，LPS或NS滴入后6h，頸動(dòng)脈放血處死動(dòng)

12、物。取部分肺組織液氮保存，用Western Blotting檢測(cè)肺組織NF-κB表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，實(shí)驗(yàn)組之間的比較采用Dunnet T檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，p≤0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，數(shù)據(jù)處理采用SPSS17.0。
　　結(jié)果：
　　L組肺組織細(xì)胞核內(nèi)NF-κB p65含量顯著高于生理鹽水對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);與L組相比，6-SH干預(yù)組肺組織細(xì)胞核內(nèi)NF-κB p65含量下降

13、，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　結(jié)論：
　　6-姜烯酚的肺組織保護(hù)作用可能與抑制NF-κB表達(dá)相關(guān)。
　　第五部分 6-姜烯酚與NF-κB分子對(duì)接蛋白構(gòu)象分析
　　目的：
　　利用分子對(duì)接技術(shù)，研究受體-配體間相互的作用，通過(guò)對(duì)6-姜烯酚與NF-κB分子對(duì)接蛋白構(gòu)象分析，評(píng)價(jià)6-姜烯酚對(duì)NF-κB信號(hào)通路的影響。
　　方法：
　　使用Discoveray Studi02.5新一代分子建

14、模和模擬環(huán)境軟件，基于形狀匹配的分子對(duì)接程序，采用模擬蒙特卡羅方法在LigandFit模塊中將6-姜烯酚與NF-κB分子的活性位點(diǎn)進(jìn)行柔性對(duì)接，觀察配體結(jié)合取向、結(jié)合構(gòu)象以及形狀匹配等多種表現(xiàn)。整個(gè)過(guò)程分為9步:(1)載入受體蛋白文件。(2)定義受體，在受體中搜索結(jié)合位點(diǎn)。(3)運(yùn)行對(duì)接流程分析對(duì)接結(jié)果。(4)優(yōu)化對(duì)接poses。(5)配體對(duì)接pose的優(yōu)化。(6)對(duì)優(yōu)化后的對(duì)接poses重新打分。(7)分析優(yōu)化后重新打分的配體pose

15、。(8)運(yùn)行一致性打分(Consensus Score)流程。(9)分析一致性打分結(jié)果。
　　結(jié)果：
　　6-SH與NF-κB的Lys145和Lys146氨基酸殘基末端結(jié)合，并且與Lys145之間產(chǎn)生交互作用。同時(shí)，6-SH能夠作用于深埋于NF-κB位于A鏈和B鏈之間的活性位點(diǎn)，它們是位于NF-κB p50 B鏈的深裂內(nèi)層結(jié)構(gòu)的氨基酸殘基Tyr57，Va158，Cys59，Tyr143，Lys145，Lys146。最終一致性