2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:通過對香煙暴露生物標(biāo)志物的測定,探討香煙在體內(nèi)的內(nèi)暴露水平;從分子生物學(xué)層面驗證吸煙對雄性大鼠生殖系統(tǒng)的毒性作用;探討表觀遺傳調(diào)控在吸煙所致雄性生殖毒性中的機(jī)制。
  方法: SD大鼠240只(雄性160只,雌性80只),隨機(jī)分為2、4、6、8、12周的低、中、高染毒劑量組及空白對照組。香煙暴露組按不同染毒劑量進(jìn)行呼吸道靜式染毒,每日一次;空白對照組未進(jìn)行香煙暴露處理。于不同時間點(diǎn)分別處死吸煙組和對照組大鼠,進(jìn)行指標(biāo)測定。香

2、煙暴露組雄鼠于處死前1周分別與雌鼠(未染毒)按1∶1合籠交配,懷孕雌鼠自然分娩后連續(xù)觀察仔鼠生長發(fā)育情況21天后實(shí)驗結(jié)束。GC-MS/MS定量分析血漿中尼古丁、可替寧含量;HE染色觀察睪丸組織的結(jié)構(gòu)形態(tài); TUNEL法測定睪丸細(xì)胞凋亡情況;免疫組織化學(xué)法檢測各組大鼠睪丸 Caspase-3活性; RT-PCR及 Western Blot法測定線粒體凋亡通路中相關(guān)基因: Apaf-1、caspase-9、Bim、Bcl-w、Bak、及Ub

3、e2B的mRNA和蛋白的表達(dá);計算各組大鼠的子代出生數(shù)及仔鼠的存活率和死亡率;測定大鼠睪丸組織中組蛋白乙?;讣敖M蛋白去乙?;傅幕钚?;運(yùn)用miRNA高通量芯片測序技術(shù)篩選香煙煙霧暴露后雄性大鼠睪丸組織 miRNAs表達(dá)譜的改變情況,并對其靶基因進(jìn)行預(yù)測。
  結(jié)果:⑴香煙暴露組大鼠出現(xiàn)張口喘息、流涎,腹式呼吸加劇,鼻噪音等癥狀;且染毒劑量越高,染毒周期越長,體重減少越明顯(P<0.05);⑵不同暴露時間及暴露劑量間尼古丁含量的變

4、化無統(tǒng)計學(xué)差異,且暴露時間與暴露劑量間無交互效應(yīng)(P>0.05);⑶隨暴露時間的延長,暴露劑量的增加,大鼠血漿中可替寧含量較空白對照組(340±41.97 ng/ml)有所增加,不同暴露周期間可替寧含量的差異存在統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05),且暴露時間與暴露劑量存在交互效應(yīng)(P<0.05);⑷香煙暴露組大鼠隨染毒時間及劑量的增加,睪丸組織病理學(xué)改變也愈加明顯。12周起大鼠睪丸組織出現(xiàn)明顯的萎縮,大量細(xì)胞裂解,甚至在高劑量組中可見各級生精細(xì)

5、胞完全消失,曲細(xì)精管空虛成網(wǎng)格狀分布。⑸隨暴露周期的延長,染毒組大鼠睪丸組織中逐漸出現(xiàn) TUNEL陽性染色,且12周組染色最為強(qiáng)烈;⑹香煙暴露組大鼠睪丸組織胞漿中含有caspase-3陽性細(xì)胞,陽性蛋白濃度于染毒第2周起逐漸增加(P<0.05),染毒第6周起 Caspase-3的蛋白表達(dá)總量顯著升高(P<0.01);⑺香煙暴露組大鼠睪丸 Apaf-1基因的mRNA和蛋白表達(dá)上調(diào),且不同暴露周期間 Apaf-1基因的mRNA表達(dá)的差異有統(tǒng)

6、計學(xué)意義(P<0.01);與空白對照組相比,12周中、高劑量染毒組 Apaf-1基因 mRNA和蛋白表達(dá)的上調(diào)有顯著性差異(P<0.05);⑻香煙暴露組大鼠睪丸 Capase-9基因的mRNA和蛋白表達(dá)上調(diào),且不同暴露周期間 Capase-9基因 mRNA和蛋白表達(dá)的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01);與空白對照組相比,12周中、高劑量染毒組Capase-9基因 mRNA表達(dá)的上調(diào)有顯著性差異(P<0.05),8周高劑量及12周中、高劑量

7、染毒組睪丸 Capase-9蛋白表達(dá)的上調(diào)有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);⑼香煙暴露組大鼠睪丸 Bim基因的mRNA和蛋白表達(dá)上調(diào),且不同暴露周期間 Bim基因 mRNA表達(dá)的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01),與空白對照組相比,12周低劑量染毒組 Bim基因 mRNA表達(dá)的上調(diào)有顯著性差異(P<0.01);⑽香煙暴露初期,大鼠睪丸 Bak基因的mRNA表達(dá)下調(diào),第8周起表達(dá)逐漸上調(diào),而 Bak的蛋白表達(dá)持續(xù)上調(diào),且不同暴露周期間 Bak蛋

8、白表達(dá)的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01);與空白對照組相比,12周高劑量組睪丸 Bak蛋白表達(dá)的上調(diào)有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);⑾香煙暴露組大鼠睪丸 Bcl-w基因的mRNA和蛋白表達(dá)下調(diào),不同暴露周期間 Bcl-w蛋白表達(dá)的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01),且暴露時間與暴露劑量間存在交互效應(yīng)(P<0.01);與空白對照組相比,6周、8周高劑量及12周各劑量組睪丸 Bcl-w蛋白表達(dá)的下調(diào)有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);⑿香煙暴露初期,

9、大鼠睪丸 Ube2B基因的mRNA表達(dá)上調(diào),第8周起表達(dá)逐漸下調(diào),而 Ube2B的蛋白表達(dá)持續(xù)下調(diào),且不同暴露周期間 Ube2B蛋白表達(dá)的差異有統(tǒng)計學(xué)意義,與空白對照組相比,8周組中、高劑量染毒組和12周中、高劑量染毒組睪丸 Ube2B蛋白表達(dá)的下調(diào)呈現(xiàn)統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05);⒀雄性大鼠的子代出生數(shù)隨香煙暴露時間及劑量的增加而減少,不同香煙暴露方式的仔鼠存活率有顯著性差異(P<0.05);⒁香煙暴露組大鼠睪丸組蛋白乙?;?HAT)

10、的活性升高,且不同暴露劑量間組蛋白乙?;富钚缘牟町愑薪y(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);與空白對照組相比,8周高劑量、12周各劑量染毒組大鼠睪丸組蛋白乙?;富钚缘脑龈哂酗@著性差異(P<0.05);⒂香煙暴露組大鼠睪丸組蛋白去乙?;?HDAC)的活性降低,與空白對照組相比,6周高劑量以后各染毒組大鼠睪丸 HDAC活性的下降有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);⒃吸煙大鼠睪丸組織 miRNA芯片篩選出5個差異性表達(dá)的miRNAs,其預(yù)測的靶基因主要參

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