視神經(jīng)脊髓炎譜系疾病患者外周血B細(xì)胞研究.pdf

1、目的：
　　視神經(jīng)脊髓炎譜系疾?。∟euromyelitis Optica Sprectrum Disorders, NMOSD）是一種由抗體介導(dǎo)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)自身免疫性星形膠質(zhì)細(xì)胞病，是造成我國(guó)青壯年神經(jīng)系統(tǒng)功能殘障的重要疾病之一。本研究擬通過(guò)檢測(cè)急性期 NMOSD患者及接受大劑量甲基潑尼龍（High dose methylprednisolone, HDMP）沖擊治療后外周血B細(xì)胞及其亞型：調(diào)節(jié)性B細(xì)胞（Regulatory

2、B cells, Bregs）、分泌白介素10的B細(xì)胞（B cells secreting interleukin-10, B10s）、記憶B細(xì)胞（Memory B cells, Bmems）、漿細(xì)胞等細(xì)胞水平，分析急性期NMOSD患者與HCs相比外周血B細(xì)胞及其亞型的變化，探討HDMP沖擊治療對(duì)急性期NMOSD患者外周血B細(xì)胞及其亞型的影響。分析 NMOSD患者應(yīng)用優(yōu)化小劑量的利妥昔單抗（Rituximab, RTX）治療的效果及啟動(dòng)

3、RTX治療的合理時(shí)機(jī)，分析外周血B細(xì)胞變化與病情的相關(guān)性，并檢測(cè)NMOSD患者接受RTX治療后外周血中抗利妥昔單抗抗體（Antirituximab antibody,ARA）水平，探討ARA產(chǎn)生對(duì)NMOSD患者RTX治療效果的影響。
　　方法：
　　納入急性期NMOSD患者13例，與10例年齡性別匹配的HCs。提取NMOSD患者HDMP治療前后及HCs外周血單個(gè)核細(xì)胞（Peripheral blood monouclear

4、cells,PBMC），應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)分析外周血中B細(xì)胞及亞型的比例及數(shù)量。納入接受優(yōu)化小劑量RTX治療的患者16例，收集患者人口學(xué)、臨床資料、B細(xì)胞監(jiān)測(cè)情況，對(duì)啟動(dòng)RTX早晚、不同時(shí)期、不同殘疾狀態(tài)的患者的治療效果進(jìn)行比較和分析。應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）試劑盒對(duì)16例應(yīng)用RTX治療預(yù)防復(fù)發(fā)的患者血標(biāo)本進(jìn)行ARA測(cè)定，并對(duì)ARA陽(yáng)性及陰性的患者進(jìn)行治療效

5、果的比較和分析。對(duì)其中6例患者進(jìn)行隨訪，動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)B細(xì)胞并分析。
　　結(jié)果：
　　1.急性期NMOSD患者外周血CD19+B細(xì)胞數(shù)量及頻率較HCs并無(wú)明顯差異（p>0.05）， CD19+CD24hiCD38hiBregs數(shù)量及頻率降低（p<0.05），CD19+IL-10+B10s細(xì)胞數(shù)量及頻率降低（p<0.05），CD19+CD27+Bmems數(shù)量及頻率無(wú)明顯差異（p>0.05），CD19+CD138+漿細(xì)胞數(shù)量及頻率升高

6、（p<0.05）。
　　2.急性期NMOSD患者外周血CD19+CD24hiCD38hiBregs數(shù)量及頻率在接受HDMP沖擊治療后較HDMP治療前相比降低（p<0.05），CD19+IL-10+B10s數(shù)量及頻率無(wú)明顯變化（p>0.05），CD19+CD27+Bmems數(shù)量及頻率升高（p<0.05）。CD19+CD138+漿細(xì)胞數(shù)量及頻率降低（p<0.05）。
　　3.重復(fù)小劑量的RTX治療可以顯著降低NMOSD患者的復(fù)發(fā)

7、次數(shù)、年復(fù)發(fā)率（Annual relapse rate, ARR）及殘疾程度（p<0.05）。距離首次發(fā)病1年內(nèi)或1年后接受RTX治療的患者各臨床指標(biāo)間并無(wú)明顯差異（p>0.05）。緩解期接受RTX治療的患者比急性期接受治療的患者發(fā)作次數(shù)、ARR及擴(kuò)展開(kāi)殘疾狀態(tài)量表（Expanded disability status scale，EDSS）均顯著好轉(zhuǎn)（p<0.05）。無(wú)論在啟動(dòng)RTX治療時(shí)EDSS評(píng)分高低，接受RTX治療后患者發(fā)作次數(shù)

8、、ARR及殘疾程度均顯著好轉(zhuǎn)（p<0.05）。
　　4.接受小劑量的RTX治療的6例NMOSD患者治療前后CD19+CD24hiCD38hiBregs數(shù)量及頻率并無(wú)顯著差異（p>0.05），RTX治療反應(yīng)好的3例患者中 Bregs回升較治療反應(yīng)差的患者快（ p<0.05）。CD19+CD27+Bmems數(shù)量及頻率在RTX治療后降低（p<0.05），而在Bmems刪除及回升方面，治療效果好者與效果差者兩組間并無(wú)顯著差異（p>0.05

9、）。
　　5.16例接受RTX治療的患者中3例出現(xiàn)ARA，并且ARA陰性患者于治療前后的復(fù)發(fā)次數(shù)比ARA陽(yáng)性患者顯著降低（p<0.05），但殘疾程度在兩組中均無(wú)顯著變化（p>0.05）。ARA的出現(xiàn)使得患者輸注RTX的周期縮短、頻率增加，其中1例ARA陽(yáng)性患者出現(xiàn)了嚴(yán)重的并發(fā)癥。
　　結(jié)論：
　　1.盡管急性期NMOSD患者外周血CD19+B細(xì)胞與HCs比較并無(wú)顯著差異，但是具有調(diào)節(jié)功能的CD19+CD24hiCD38

10、hiBregs細(xì)胞及CD19+IL-10+B10s細(xì)胞數(shù)量減少，可能調(diào)節(jié)功能受損。在NMOSD患者急性發(fā)病中CD19+CD138+漿細(xì)胞數(shù)量升高并分泌自身抗體，發(fā)揮致病作用。
　　2.盡管HDMP抑制了CD19+CD24hiCD38hiBreg細(xì)胞數(shù)量及頻率，但對(duì)能分泌IL-10的B細(xì)胞數(shù)量與頻率沒(méi)有影響，仍可通過(guò)分泌IL-10發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)功能。HDMP可能不能夠抑制Bmems的增殖，不能控制疾病的復(fù)發(fā)。HDMP能夠減少CD19+

11、CD138+漿細(xì)胞產(chǎn)生致病性抗體，從而控制病情進(jìn)一步進(jìn)展。小劑量糖皮質(zhì)激素（Glucocorticoid，GC）不能明顯抑制與體液免疫直接相關(guān)的Bmems及漿細(xì)胞數(shù)量及頻率，單用小劑量GC可能不能完全控制NMOSD疾病復(fù)發(fā)。
　　3.優(yōu)化小劑量的RTX在NMOSD患者中預(yù)防復(fù)發(fā)有效，能夠減少?gòu)?fù)發(fā)次數(shù)、ARR并改善殘疾程度。NMOSD患者無(wú)論是否能在首次發(fā)病1年內(nèi)啟動(dòng)RTX治療，在啟動(dòng)治療后患者均可獲益。NMOSD患者在緩解期啟動(dòng)治

12、療臨床反應(yīng)更好。Bregs回升速度快慢可能反映RTX治療反應(yīng)好壞，Bmems回升速度可能與RTX治療療效無(wú)關(guān)。
　　4.在應(yīng)用小劑量RTX間歇補(bǔ)充治療預(yù)防NMOSD復(fù)發(fā)的患者血漿中存在ARA。接受RTX治療的NMOSD患者，血漿中是否可檢測(cè)到ARA與NMOSD臨床特點(diǎn)不相關(guān)。ARA的出現(xiàn)可能不影響RTX刪除外周血B細(xì)胞的藥物功能，但可能加速RTX降解或封閉其有效蛋白，相對(duì)減弱其藥效。監(jiān)測(cè)外周血CD19+細(xì)胞頻率，調(diào)整RTX補(bǔ)充治療