干擾素-γ及其基因多態(tài)性與視神經(jīng)脊髓炎譜系疾病的相關(guān)研究.pdf

1、視神經(jīng)脊髓炎（neuromyelitis optica,NMO）于1894年由Devic首次描述，又稱Devic病或Devic綜合征，是一種累及視神經(jīng)及脊髓的炎性脫髓鞘疾病，發(fā)病機(jī)制尚不明確。臨床呈進(jìn)行性或緩解與復(fù)發(fā)病程，曾一度被認(rèn)為是MS的亞型，直至特異性抗體水通道蛋白4（AQP4）抗體，即NMO-IgG的發(fā)現(xiàn)，2007年 Wingerchuk提出視神經(jīng)脊髓炎譜系疾?。╪euromyelitis optica spectrum dis

2、orders,NMOSD）這一概念，并將NMO-IgG陽(yáng)性作為必要條件之一。隨著后續(xù)研究的展開人們對(duì)NMOSD的認(rèn)識(shí)逐漸豐滿，2015年國(guó)際NMO診斷小組修定了新的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并將NMO及NMOSD統(tǒng)一命名為NMOSD。
　　干擾素-γ（Interferon-γ，IFN-γ）由活化的T細(xì)胞和NK細(xì)胞產(chǎn)生，又名巨噬細(xì)胞活化因子，是Ⅱ型干擾素的唯一成員，具有免疫調(diào)節(jié)的特性，可參與機(jī)體的炎癥反應(yīng)誘導(dǎo)免疫應(yīng)答。人類 IFN-γ基因位于染色體

3、12q24.1，含有4個(gè)外顯子和3個(gè)內(nèi)含子，長(zhǎng)約5.4kb。近年來(lái)一些研究表明IFN-γ可能與NMOSD的發(fā)病有關(guān)，參與NMOSD患者機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)。IFN-γ第一內(nèi)含子區(qū)SNP位點(diǎn)rs2430561（A/T）及第三內(nèi)含子區(qū)SNP位點(diǎn)rs2234685（A/G）具有基因多態(tài)性，且rs2430561位點(diǎn)與IFN-γ的生成關(guān)系密切。研究表明rs2430561位點(diǎn)基因多態(tài)性與MS的發(fā)病不相關(guān)， rs2234685位點(diǎn)基因多態(tài)性與MS發(fā)病相關(guān)。

4、但尚無(wú)相關(guān)研究報(bào)道上述兩位點(diǎn)基因多態(tài)性是否與NMOSD易患性相關(guān)。因此，有必要從分子生物學(xué)角度對(duì)IFN-γrs2430561及rs2234685兩位點(diǎn)基因多態(tài)性及其與NMOSD的相關(guān)性作以下討論。
　　目的：
　　1從分子生物學(xué)角度研究NMOSD易患性與IFN-γ第一內(nèi)含子區(qū)rs2430561和第三內(nèi)含子區(qū)rs2234685兩位點(diǎn)基因多態(tài)性的相關(guān)性，探討其在NMOSD疾病中的作用。
　　2研究NMOSD患者血清中IFN

5、-γ水平的變化，探討IFN-γ在NMOSD發(fā)病中的作用。
　　3探討NMOSD患者IFN-γ基因多態(tài)性與急性期IFN-γ水平、EDSS評(píng)分、急性期與緩解期EDSS分值差、體重指數(shù)、發(fā)病次數(shù)、病程等之間的關(guān)系，進(jìn)一步探索其在NMOSD發(fā)病中的作用。
　　4分析急性期IFN-γ水平與EDSS評(píng)分、初次發(fā)病年歲、體重指數(shù)、病程、發(fā)病次數(shù)之間的相關(guān)性。
　　5分析EDSS評(píng)分及EDSS分值差與IFN-γ水平之間的相關(guān)性，分析E

6、DSS評(píng)分與發(fā)病次數(shù)、初次發(fā)病年歲、病程、體重指數(shù)之間的相關(guān)性。
　　6分析各基因型NMOSD患者相關(guān)臨床資料（性別、AQP4陽(yáng)性的分布、EDSS評(píng)分、初次發(fā)病年歲、發(fā)病次數(shù)、體重指數(shù)）有無(wú)差別。
　　方法：
　　1病例組：選擇50例NMOSD患者，均符合2015年由Wingerchuk等人制定的NMOSD診斷標(biāo)準(zhǔn)，并詳細(xì)記錄病程、發(fā)病次數(shù)、EDSS評(píng)分、家族史、誘發(fā)因素、輔助檢查（VEP、核磁共振成像、腦脊液及血清A

7、QP4抗體）等臨床資料。對(duì)照組：選擇60例無(wú)血緣關(guān)系的健康人，年齡、性別均與病例組匹配，近期無(wú)感染、未應(yīng)用免疫抑制劑；
　　2抽取研究對(duì)象清晨空腹肘靜脈血，并用EDTA抗凝，三天內(nèi)用樹脂型 TM基因組DNA提取試劑盒（純化樹脂、GN結(jié)合液、漂洗液）按步驟提取基因組DNA；
　　3采用基因測(cè)序的方法對(duì)IFN-γ基因 SNP位點(diǎn)rs2430561、rs2234685進(jìn)行檢測(cè)；
　　4從血液標(biāo)本中分離血清，應(yīng)用雙抗體夾心酶聯(lián)

8、免疫（ELISA）方法測(cè)定血清中IFN-γ的水平；
　　5對(duì)NMOSD患者分別進(jìn)行EDSS評(píng)分、初次發(fā)病年歲、病程、發(fā)病次數(shù)、體重指數(shù)等臨床資料收集；
　　6應(yīng)用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。病例組和對(duì)照組基因型的分布經(jīng)哈迪-溫伯格平衡檢驗(yàn)，證明有群體代表性。IFN-γ基因型、等位基因數(shù)、性別用直接計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)，計(jì)算各等位基因及基因型頻率，組間比較用X2檢驗(yàn)。IFN-γ水平、EDSS評(píng)分、年齡、病程、發(fā)病次數(shù)以及體重指數(shù)以

9、均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較用t檢驗(yàn)，多組間比較用單因素方差分析或非參數(shù)檢驗(yàn)。采用雙變量相關(guān)與回歸分析檢驗(yàn)EDSS評(píng)分與IFN-γ急性期和緩解期水平、年齡、病程、發(fā)病次數(shù)、體重指數(shù)間的相關(guān)性。顯著檢驗(yàn)水準(zhǔn)為P＜0.05。
　　結(jié)果：
　　1各組間血清IFN-γ水平比較
　　急性期NMOSD組IFN-γ水平（14.9892±5.1227）pg/ml與健康對(duì)照組（8.1623±7.8878）pg/ml比較差異有統(tǒng)

10、計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；急性期NM OSD組IFN-γ水平（14.9892±5.1227）pg/ml與緩解期NMOSD組（7.4697±5.6612）pg/ml比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；緩解期NMOSD組IFN-γ水平（7.4697±5.6612）pg/ml與健康對(duì)照組（8.1623±7.8878）pg/ml比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　2各組基因型分布的哈迪-溫伯格（Hardy-Weinberg）平衡

11、檢驗(yàn)
　　1) IFN-γ snp位點(diǎn)rs2234685未檢測(cè)到突變基因型，110例均為AA純合子。
　　2) NMOSD組及健康對(duì)照組IFN-γsnp位點(diǎn)rs2430561基因型頻率經(jīng)檢驗(yàn)，符合Hardy-Weinberg平衡定律（P＞0.05）。
　　3各組間基因型分布和等位基因頻率的比較
　　1) IFN-γ snp位點(diǎn)rs2234685未檢測(cè)到突變基因型，110例均為AA純合子。
　　2) IFN-

12、γ rs2234685位點(diǎn)基因型分布：NMOSD組與健康對(duì)照組比較無(wú)顯著差異（P＞0.05）；該位點(diǎn)A及T等位基因頻率：NMOSD組與健康對(duì)照組比較無(wú)顯著差異（P＞0.05）。
　　4 IFN-γ各基因型與NMOSD組臨床資料間的關(guān)系
　　IFN-γ各基因型與NMOSD組EDSS評(píng)分組間比較， TT與AT差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），TT與AA、AT與AA比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；IFN-γ各基因型組與NM

13、OSD組急性期與緩解期EDSS分值差、AQP4陽(yáng)性率、性別、初次發(fā)病年歲、病程、發(fā)病次數(shù)、體重指數(shù)BMI進(jìn)行組間比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　5 NMOSD組急性期與緩解期EDSS評(píng)分間的關(guān)系
　　NMOSD組急性期EDSS評(píng)分（4.24±2.32）與緩解期EDSS評(píng)分（3.21±1.96）間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　6臨床統(tǒng)計(jì)資料的相關(guān)性及回歸性比較
　　EDSS評(píng)分與病程

14、、初次發(fā)病年歲、發(fā)病次數(shù)、體重指數(shù)呈正相關(guān)（P＜0.05）。
　　7病毒感染、妊娠等可能為NMOSD的誘因。
　　結(jié)論：
　　150例NMOSD患者IFN-γ第三內(nèi)含子區(qū)snp位點(diǎn)rs2234685均為AA純合子基因型，IFN-γrs2234685位點(diǎn)可能與NMOSD易感性不相關(guān)。
　　2 IFN-γ第一內(nèi)含子區(qū)snp位點(diǎn)rs2430561可能與NMOSD易感性不相關(guān)。
　　3 NMOSD組急性期IFN-γ

15、水平急劇升高，隨著病情好轉(zhuǎn)至緩解期IFN-γ水平恢復(fù)至正常水平，表明在NMOSD的發(fā)病過(guò)程中IFN-γ起促進(jìn)作用。
　　4 IFN-γ基因多態(tài)性與急性期IFN-γ水平、EDSS評(píng)分、急性期與緩解期EDSS分值差、AQP4陽(yáng)性率、性別、初次發(fā)病年歲、體重指數(shù)、病程、發(fā)病次數(shù)等均無(wú)顯著相關(guān)性。
　　5 IFN-γ水平與EDSS評(píng)分無(wú)顯著相關(guān)性；急性期IFN-γ水平與初次發(fā)病年歲、體重指數(shù)、病程、發(fā)病次數(shù)均無(wú)顯著相關(guān)性。