SIRT1激動(dòng)劑SRT1720對(duì)THP-1細(xì)胞增殖、凋亡及細(xì)胞周期的影響.pdf

1、目的:通過(guò)研究沉默信息調(diào)節(jié)因子2-相關(guān)酶類(lèi)-1(SIRT1)的激動(dòng)劑SRT1720在體外對(duì)THP-1細(xì)胞（急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞株）增殖、凋亡及細(xì)胞周期的影響，探討SIRT1在急性單核細(xì)胞白血病的作用及可能的分子機(jī)制，從而為闡明SIRT1在急性單核細(xì)胞白血病的診斷、治療中的潛在價(jià)值提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　1、SIRT1激動(dòng)劑SRT1720刺激THP-1細(xì)胞。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期急性單核細(xì)胞白血病THP-1細(xì)胞，于實(shí)驗(yàn)第1天分

2、別加入SRT1720使終濃度分別為1μM、2μM、3μM、4μM、5μM、6μM，陰性對(duì)照組加等體積的二甲基亞砜(DMSO)，未用藥物處理的細(xì)胞為空白對(duì)照組，摸索SRT1720的有效作用濃度。
　　2、細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察及生長(zhǎng)曲線繪制。每隔24 h在倒置光學(xué)顯微鏡下觀察各實(shí)驗(yàn)組THP-1細(xì)胞的形態(tài)及生長(zhǎng)狀態(tài)，行細(xì)胞計(jì)數(shù)，記錄并繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。
　　3、細(xì)胞增殖檢測(cè)。加入SRT1720前先用10μM CSFE標(biāo)記THP-1細(xì)胞，

3、SRT1720作用4天后用流式細(xì)胞儀檢測(cè)CSFE熒光。
　　4、細(xì)胞凋亡檢測(cè)。SRT1720作用THP-1細(xì)胞48 h后收集細(xì)胞，加入凋亡檢測(cè)試劑膜聯(lián)蛋白V-異硫氰酸熒光素（FITC）及碘化丙啶(PI)避光孵育后用流式細(xì)胞儀檢測(cè)。
　　5、細(xì)胞周期檢測(cè)。SRT1720作用THP-1細(xì)胞48 h后收集細(xì)胞，并制備單細(xì)胞懸液，用70％冰乙醇固定，加核糖核酸酶A(RNase A)水浴后再加細(xì)胞周期檢測(cè)試劑PI，避光孵育后用流式細(xì)胞

4、儀檢測(cè)。
　　6、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，p＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（X±S）表示，組間差異采用Student t檢驗(yàn)或者單因素方差分析(One-Way ANOVA)。
　　結(jié)果：
　　1、2～6μM SRT1720組THP-1細(xì)胞皺縮、變形，大小不均，細(xì)胞核皺縮，有顆粒狀物質(zhì)及空泡，細(xì)胞數(shù)減少，碎片增多，SRT1720濃度越高，時(shí)間越長(zhǎng)，THP-1細(xì)胞形態(tài)改

5、變?cè)矫黠@。
　　2、2～6μM SRT1720組THP-1細(xì)胞第4天增殖指數(shù)明顯下降，SRT1720濃度越高，增殖指數(shù)下降越明顯。
　　3、2～6μM SRT1720組THP-1細(xì)胞48 h的凋亡率明顯升高，SRT1720濃度越高，凋亡率升高越明顯。
　　4、3～6μM SRT1720組S期及G2/M期的THP-1細(xì)胞48 h百分比明顯增加，SRT1720濃度越高，S期及G2/M期細(xì)胞百分比增加越明顯。
　　結(jié)論