自噬調(diào)節(jié)層流剪切應(yīng)力下血管內(nèi)皮細(xì)胞eNOS及ET-1表達(dá)的初步研究.pdf

1、【目的】:
　　層流剪切應(yīng)力調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞功能，但其具體機(jī)制尚未完全闡明。本研究采用體外細(xì)胞灌流系統(tǒng)以及離體血管灌流系統(tǒng)，觀察層流剪切應(yīng)力對血管內(nèi)皮細(xì)胞自噬的影響，以及自噬對剪切應(yīng)力誘導(dǎo)的內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）和內(nèi)皮素-1（ET-1）表達(dá)的影響。
　　【方法】:
　　將HUVECs及分離的新西蘭兔頸總動脈置于體外灌流系統(tǒng)，分別在0、5、15 dyne/cm2剪切應(yīng)力的條件下處理1h，用RT-PCR和weste

2、rn blot分別檢測LC3、Bcline-1、p62、eNOS和ET-1的mRNA和蛋白的表達(dá)。采用胃酶抑素以及巴伐洛霉素，孵育2 h，觀察LC3蛋白的表達(dá)。在此基礎(chǔ)上，自噬抑制劑3-MA或自噬激動劑雷帕霉素孵育剪切應(yīng)力（1 h）處理后的血管內(nèi)皮細(xì)胞或兔頸總動脈30min，觀察自噬干預(yù)對剪切應(yīng)力誘導(dǎo)的eNOS和ET-1表達(dá)的影響。
　　【結(jié)果】:
　　結(jié)果表明，層流剪切應(yīng)力上調(diào)內(nèi)皮細(xì)胞以及離體血管eNOS水平，下調(diào)ET-1

3、的表達(dá)。層流剪切應(yīng)力環(huán)境下，自噬標(biāo)記物Bcline-1以及LC3的表達(dá)增加，自噬障礙標(biāo)記物p62表達(dá)降低。給予自噬誘導(dǎo)劑雷帕霉素或自噬抑制劑3-MA孵育剪切應(yīng)力誘導(dǎo)的HUVECs以及兔頸總動脈30 min，結(jié)果表明雷帕霉素進(jìn)一步增強(qiáng)層流剪切應(yīng)力處理的eNOS的上調(diào)以及進(jìn)一步減弱ET-1的下調(diào)；3-MA則抑制層流剪切應(yīng)力誘導(dǎo)的eNOS的上調(diào)，部分地逆轉(zhuǎn)層流剪切應(yīng)力引起的ET-1表達(dá)下調(diào)。
　　【結(jié)論】:
　　自噬參與層流剪切應(yīng)