自制復(fù)方青珠抗瘢痕膏對巴馬小型豬皮膚瘢痕的影響.pdf

1、目的：采用巴馬小型豬構(gòu)建豬背皮膚瘢痕模型，并使用自制復(fù)方青珠抗瘢痕膏（青蒿琥酯和珍珠水解液）作用于皮膚瘢痕，觀察用藥療效并檢測瘢痕組織中I、III型膠原表達(dá)的情況。評價(jià)小型豬皮膚瘢痕模型在抗瘢痕藥物研發(fā)中的應(yīng)用價(jià)值，探索復(fù)方青珠抗瘢痕膏治療模型皮膚瘢痕的效果。
　　方法：制備含青蒿琥酯和珍珠水解液的抗瘢痕制劑命名為復(fù)方青珠抗瘢痕膏。選取健康雌性4月齡巴馬小型豬6只。采用自制溫控燙傷儀（100℃、20s），于豬背部制備燙傷創(chuàng)面。燙傷

2、制備后傷口暴露，不做特殊處理。動物隨機(jī)將動物分為六組，分圈飼養(yǎng)：①未治療組，②基質(zhì)對照組，③珍珠水解液組，④青蒿琥酯組，⑤復(fù)方青珠抗瘢痕膏組，⑥硅酮凝膠組。于建模后第28日開始用藥，2次/日，連續(xù)用藥28日。建模后第56日處死動物，Nageschmidt法計(jì)算創(chuàng)面愈合率。切取瘢痕組織，收集標(biāo)本。采用HE染色觀察各組瘢痕上皮層、真皮層細(xì)胞及膠原纖維并顯微鏡下觀察瘢痕的厚度（上皮至真皮固有層）。Masson三色膠原染色，觀察膠原纖維束的排列

3、情況及膠原纖維面密度計(jì)數(shù)。采取免疫組織化學(xué)方法檢測各組瘢痕組織I、III型膠原蛋白的表達(dá)。熒光定量RT-PCR法檢測各組瘢痕組織Ⅰ、Ⅲ型膠原纖維mRNA的表達(dá)水平。采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析處理。
　　結(jié)果：1、連續(xù)用藥28日后（燙傷制備后56天）未治療組與膏體基質(zhì)對照組瘢痕仍明顯高出于皮膚表面，顏色較深紅，質(zhì)地堅(jiān)韌。珍珠水解液組瘢痕略高出皮膚表面，觸之質(zhì)中等偏軟，色澤較紅。青蒿琥酯組、復(fù)方青珠抗瘢痕膏組瘢痕低

4、平，質(zhì)軟，色接近正常膚色。硅酮凝膠組瘢痕變平，顏色更接近正常皮膚顏色，質(zhì)地軟，表面平滑。
　　2、HE染色可見珍珠水解液組、青蒿琥酯組、復(fù)方青珠膏組和硅酮凝膠組，出現(xiàn)不同程度的成纖維細(xì)胞數(shù)量減少，膠原纖維變稀疏，排列較整齊。其中，復(fù)方青珠抗瘢痕膏組效果最明顯；未治療組和基質(zhì)對照組上皮層及真皮層排列紊亂且厚度增加明顯，其中含有大量排列紊亂無章的膠原纖維，呈旋渦狀排列。連續(xù)用藥28天后，可以發(fā)現(xiàn)珍珠水解液組、青蒿琥酯組、復(fù)方青珠抗瘢痕

5、膏組和硅酮凝膠組可以明顯抑制瘢痕的生長，其中復(fù)方青珠抗瘢痕膏組和硅酮凝膠組效果明顯。Masson三色膠原染色可見用藥后各組瘢痕中膠原纖維的密度減少，未見明顯的膠原漩渦及結(jié)節(jié)。
　　3、免疫組織化學(xué)法：I型膠原蛋白在復(fù)方青珠抗瘢痕膏組、青蒿琥酯組、珍珠水解液組和硅酮凝膠組中的表達(dá)均較未治療組低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）?；|(zhì)組與未治療組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；而III型膠原蛋白的表達(dá)增加，復(fù)方青珠抗瘢痕膏組、青

6、蒿琥酯組、珍珠水解液組和硅酮凝膠組與未治療組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），基質(zhì)組與未治療組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　4、熒光定量RT-PCR檢測后顯示：I型膠原mRNA表達(dá)水平明顯下調(diào)，與未治療組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.01），基質(zhì)組與未治療組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；而III型膠原的mRNA表達(dá)則呈不同程度的上升，與未治療組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），基質(zhì)組與未治療組比