正常皮膚、瘢痕疙瘩和不同時期增生性瘢痕中巨噬細胞分布的比較研究.pdf

1、目的:目前病理性瘢痕的形成機制還沒有定論,也缺乏有效治療病理性瘢痕的方法,但是越來越多的研究提示巨噬細胞在創(chuàng)傷修復過程中發(fā)揮重要作用,巨噬細胞的數(shù)量和功能的異常與病理性瘢痕形成有關。本實驗通過免疫組織化學方法應用鼠抗人巨噬細胞單克隆抗體CD68檢測正常皮膚、瘢痕疙瘩和不同時期增生性瘢痕中的巨噬細胞,比較研究正常皮膚、瘢痕疙瘩和不同時期增生性瘢痕中巨噬細胞分布位置和數(shù)量的差異。
　　方法:收集臨床病理性瘢痕切除手術后標本17例,分為

2、A、B、C、D三組(分組依據(jù)見后文):A組瘢痕疙瘩,B組增生性瘢痕(增生時間小于6個月),C組增生性瘢痕(增生時間6～12個月),D組成熟性瘢痕(增生性瘢痕成熟期,增生時間大于8年)。另取正常皮膚標本3例作為對照(E組)。將所取標本于10％的中性福爾馬林中固定12h后,常規(guī)梯度酒精脫水,浸蠟包埋切片,分別做蘇木精-伊紅(HE)染色和免疫組織化學染色。用鼠抗人巨噬細胞單克隆抗體CD68染色后的巨噬細胞陽性信號為黃色或棕黃色顆粒。巨噬細胞圖

3、像分析方法:在400倍顯微鏡下分別觀察各組呈棕黃色或黃色的巨噬細胞陽性顆粒個數(shù),并進行計數(shù)。每張切片觀察5個視野取其均數(shù)進行比較(同一人在同一臺顯微鏡相同放大倍數(shù)下觀察計數(shù))。
　　結果:一. HE染色光鏡下組織形態(tài):①正常皮膚組表皮透明層與角質(zhì)層相對較厚;真皮乳頭突出明顯,乳突數(shù)目較多;網(wǎng)織層見成纖維細胞附著,核小,著色深,細胞質(zhì)少,數(shù)目較少。②瘢痕疙瘩組織表皮萎縮,基底層、棘層細胞胞體大,層數(shù)增加,相對層數(shù)較多;顆粒層、透明層

4、與角質(zhì)層僅見較薄的嗜酸性染色層,無法區(qū)分;真皮乳頭可見,乳突數(shù)目少,低平;網(wǎng)織層厚,致密,見粗大的膠原,染色深,排列紊亂,有玻璃樣變性,并可見血管、淋巴管,毛細血管閉鎖;成纖維細胞兩層均見,數(shù)目多。③增生性瘢痕組表皮基底層和棘層細胞相對層數(shù)較多,其細胞間連接較正常皮膚顯得松散;透明層與角質(zhì)層變薄明顯;真皮乳頭突出度較正常皮膚低矮,較平,數(shù)目較正常皮膚減少;網(wǎng)織層較厚,較致密,并可見血管、淋巴管,毛細血管擴張;成纖維細胞兩層均見,數(shù)目多。

5、④成熟性瘢痕表皮矮柱狀的基底層細胞和真皮相連接,附著于基底膜,其相對層數(shù)相對增生性瘢痕較少;其細胞間連接較正常皮膚顯得松散。顆粒層細胞呈較扁的梭形,較正常皮膚明顯變薄;透明層與角質(zhì)層變薄明顯。真皮乳頭層較疏松,染色較淡,其下為網(wǎng)織層,較增生性瘢痕和瘢痕疙瘩薄,較致密,見粗大的膠原,染色深,較不規(guī)則,并可見毛細血管閉鎖。二.巨噬細胞免疫組化圖像分析:各病理性瘢痕組織中巨噬細胞陽性顆粒數(shù)明顯高于正常皮膚組,相比較有統(tǒng)計學意義(P<0.01)

6、。瘢痕疙瘩組與增生時間小于6個月組之間比較有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。瘢痕疙瘩組與增生時間大于8年組有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。增生期瘢痕與成熟期瘢痕組之間有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。瘢痕疙瘩組與增生時間6～12個月組之間比較無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。增生性瘢痕小于6個月組與6～12個月組之間比較無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　結論:與正常皮膚相比,巨噬細胞在瘢痕疙瘩和不同時期增生性瘢痕中存在著分布位置和數(shù)量的異常,