制何首烏活性成分體內(nèi)外代謝性質(zhì)研究.pdf

1、何首烏是蓼科植物何首烏 Polygonum multijiorum（PM）的干燥塊根，臨床多以制何首烏入藥，何首烏具有延緩衰老、提高記憶力、調(diào)節(jié)血脂、抗動(dòng)脈粥樣硬化和烏發(fā)等作用。在中藥處方和已上市中成藥中廣泛應(yīng)用。然而，近年來關(guān)于服用何首烏引起肝臟毒性的報(bào)道日益增加，但何首烏致肝損傷的確切機(jī)制和毒性物質(zhì)基礎(chǔ)尚不完全明了。盡管有研究表明，何首烏的肝毒性與其活性成分在體內(nèi)的代謝活化有關(guān)，但目前關(guān)于何首烏活性成分的體內(nèi)外代謝性質(zhì)研究尚不系統(tǒng)。

2、
　　為此，本課題以制何首烏的活性成分大黃素（EM）、二苯乙烯苷（TSG）和蘆薈大黃素（AE）為研究對(duì)象，應(yīng)用可同時(shí)定量檢測(cè)生物樣品中3個(gè)活性成分的LC-MS/MS方法，開展制何首烏活性成分的血漿藥代動(dòng)力學(xué)、組織分布，尿液、糞便和膽汁排泄研究。在體外肝微粒體和重組酶孵育體系以及 Caco-2細(xì)胞模型上，評(píng)價(jià)制何首烏活性成分在肝微粒體的體外代謝性質(zhì)和轉(zhuǎn)運(yùn)性質(zhì)，為何首烏的藥理毒理研究以及臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和依據(jù)。
　　本課題首

3、先建立并驗(yàn)證了同時(shí)定量檢測(cè)制何首烏中 EM、AE和 TSG的LC-MS/MS方法，在樣品前處理中應(yīng)用特異性酶水解，對(duì)活性成分的葡糖醛酸結(jié)合物進(jìn)行間接定量。方法學(xué)驗(yàn)證的結(jié)果表明，該方法靈敏可靠，能滿足生物樣品的定量分析要求。
　　大鼠單次灌胃0.5 g/kg制何首烏醇提取物后，觀察到EM和AE吸收和消除迅速，血藥濃度均在1 h達(dá)到峰值，t1/2分別為0.5 h和0.4 h，在血漿中可檢測(cè)到大量EM和AE的葡糖醛酸結(jié)合物，其血藥濃度峰

4、值分別為EM和AE的18.4和19.8倍；TSG的血藥濃度較低，原型和葡糖醛酸結(jié)合物的Cmax分別為(39.1±23.3) ng/mL和(61±34.4) ng/mL，血藥濃度分別在0.25 h和1 h達(dá)峰，隨后迅速消除。大鼠灌胃給藥EM或AE單體后，EM和AE原型吸收迅速，它們的葡糖醛酸結(jié)合物也是血漿中的主要成分，濃度顯著高于原型。與提取物給藥組相比，EM和AE原型的血漿消除顯著減慢，消除半衰期和體內(nèi)滯留時(shí)間顯著延長，相對(duì)應(yīng)的，它們的

5、葡糖醛酸結(jié)合產(chǎn)物的血漿濃度低于提取物。
　　膽管插管大鼠口服制何首烏提取物后，在膽汁中可檢測(cè)到EM、AE和TSG的原型及其葡糖醛酸結(jié)合物，它們的72 h總膽汁累積排泄率分別為49.5％、48.7%和1.6%，表明膽汁排泄是EM和AE的主要清除途徑之一。大鼠口服EM或AE單體后，EM和AE的72 h膽汁累積排泄率分別為37.7%和7.3%。與提取物給藥組相比，EM及AE的膽汁排泄均顯著降低。EM、AE和TSG在Caco-2細(xì)胞上的透

6、膜性良好；應(yīng)用轉(zhuǎn)運(yùn)體膜-ATP酶實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)EM和AE可能是BCRP的底物。將BCRP特異性抑制劑KO143與制何首烏提取物給大鼠同服，觀察到抑制劑能顯著降低制何首烏提取物中EM和AE原型的累積膽汁排泄率，表明外排轉(zhuǎn)運(yùn)體參與了EM和AE的膽汁外排。
　　大鼠灌胃制何首烏提取物后，EM、AE和TSG能廣泛地分布到各組織器官，大部分組織的分布濃度在0.25 h達(dá)峰；EM和AE的原型在肝臟和腎臟的暴露濃度最高，它們的葡糖醛酸結(jié)合物在血漿的

7、暴露濃度較高；EM和AE的72 h總尿液累積排泄率分別為13.1%和9.4%，總糞便累積排泄率為14.0%和14.3%，原型是其主要排泄形式；TSG在大鼠體內(nèi)代謝廣泛，給藥1 h后的組織樣品和給藥后的排泄物中檢測(cè)不到其原型和結(jié)合物。
　　在人和大鼠肝微粒體中，EM和TSG能發(fā)生I相CYP酶介導(dǎo)的代謝和II相葡糖醛酸結(jié)合反應(yīng)，它們的清除率有一定種屬差異；AE在人肝微粒體中以NADPH依賴的I相代謝為主，在鼠肝微粒體中同時(shí)存在I相代謝

8、和II相結(jié)合反應(yīng)，在反應(yīng)類型上存在種屬差異。肝微粒體代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)表明，EM、AE和TSG在人和大鼠微粒體中代謝消除迅速，在鼠肝微粒體中的清除率CLint均顯著高于人肝微粒體。
　　代謝表型研究表明，EM和 AE的 I相代謝由多個(gè) CYP同工酶介導(dǎo)，參與EM代謝的主要同工酶為CYP1A2、2C9和3A4，代謝貢獻(xiàn)率均大于20%；參與AE代謝的主要同工酶為CYP1A2、2B6、2C19和3A4，其中CYP1A2和3A4對(duì)AE代謝的貢

9、獻(xiàn)率大于20%。EM的II相代謝主要由UGT1A1、1A8、1A10、2B7介導(dǎo)。EM和AE對(duì)CYP同工酶有抑制作用，分別為CYP1A2的強(qiáng)抑制劑和中等強(qiáng)抑制劑，所以EM和AE與CYP1A2的底物藥物合用時(shí)應(yīng)注意可能產(chǎn)生的藥-藥相互作用。
　　綜上所述，制何首烏活性成分EM、AE和TSG口服吸收迅速，可在肝臟和腎臟分布富集，代謝消除迅速。在大鼠，EM和AE均可經(jīng)CYP和UGT酶介導(dǎo)代謝，并可能經(jīng)轉(zhuǎn)運(yùn)體BCRP介導(dǎo)，主動(dòng)外排進(jìn)入膽汁