版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
1、背景與目的:
1.蛋白質巖藻糖基化在子宮內(nèi)膜對胚胎的接受能力方面發(fā)揮重要作用。
2.巖藻糖基轉移酶Ⅳ(FUT4)在哺乳動物子宮內(nèi)膜上皮細胞中呈階段特異性表達,因此被作為評價子宮內(nèi)膜接受態(tài)的一個重要指標。
3. microRNAs是一種內(nèi)源性非編碼小分子RNA,miR-200c是miR-200家族的成員之一,在人類生殖過程中發(fā)揮作用。但是,miR-200c與FUT4的關系以及其在子宮內(nèi)膜接受態(tài)的建立過程中的作
2、用未見報道。
4.本研究旨在探討miR-200c對子宮內(nèi)膜接受態(tài)的建立、胚胎著床的影響及其作用機制,闡述miR-200c對哺乳動物胚胎著床過程的調(diào)控作用。
方法:
1.通過Real-time PCR,Western blot,ELISA檢測正常未孕、不孕癥、正常早孕、流產(chǎn)患者血清中miR-200c、FUT4的表達。
2. CCK8、平板克隆形成實驗和細胞體外黏附實驗檢測miR-200c對細胞增殖及
3、接受胚胎能力的影響。
3.雙熒光素酶基因報告實驗驗證FUT4是否是miR-200c的靶基因。
4.通過Wnt/β-catenin信號通路進一步研究miR-200c對胚胎著床的調(diào)控作用。
結果:
1. PCR、ELISA和Western blot方法檢測結果顯示:不孕癥患者血清中miR-200c的表達比正常未孕女性高,流產(chǎn)患者血清中miR-200c的含量比正常早孕女性血清中高,具有顯著性差異(*p<
4、0.05;***p<0.001)。不孕癥患者血清中FUT4的表達比正常未孕女性低,流產(chǎn)患者血清中FUT4的含量比正常早孕女性血清中低,具有顯著型差異(**p<0.01;***p<0.001)
2. miR-200c抑制細胞增殖和胚胎黏附功能。CCK-8實驗連續(xù)5天記錄細胞的生長情況。轉染miR-200c mimics細胞組的生長速度顯著慢于對照組細胞,而轉染Anti-miR-200c后,細胞的增殖能力顯著高于對照組。平板克隆形
5、成實驗結果顯示,miR-200c mimics轉染組細胞的克隆形成數(shù)低于對照組,而轉染Anti-mR-200c細胞組細胞的克隆形成數(shù)顯著高于對照組,差異存在統(tǒng)計學意義(**p<0.01;***p<0.001)。細胞體外黏附實驗結果顯示,轉染miR-200c mimics細胞組的黏附能力顯著低于對照組,轉染Anti-miR-200c細胞組的黏附能力顯著高于對照組,差異存在統(tǒng)計學意義(*p<0.05)。
3. FUT4是miR-2
6、00c的靶基因。通過軟件預測發(fā)現(xiàn)miR-200c與FUT4存在結合位點,因此我們構建了相應熒光素酶載體,同時構建了相應的突變型載體,與miR-200c mimics共同轉染進入RL-95細胞中。轉染miR-200c mimics與熒光素酶載體的RL95-2細胞中,F(xiàn)UT4的熒光素酶活性低于對照組(*p<0.05);轉染miR-200c mimics與熒光素酶載體的RL95-2細胞中FUT4的熒光素酶活性與轉染突變型載體組FUT4的熒光素
7、酶活性不存在統(tǒng)計學差異。Western blot結果顯示miR-200c mimics轉染后可顯著下調(diào)FUT4的表達,當與FUT4 cDNA共轉染后,又可以回調(diào)FUT4的表達。Anti-miR-200c轉染后可顯著上調(diào)FUT4的表達,當與FUT4 siRNA共轉染后可回調(diào)FUT4的表達。細胞免疫熒光染色得到了相同的結果,miR-200c可下調(diào)FUT4的表達。
4. miR-200c通過抑制Wnt/β-catenin信號通路的激
8、活影響子宮內(nèi)膜細胞的功能。轉染miR-200c可抑制p-GSK3β、β-catenin的表達,其結果與使用Wnt/β-catenin通路抑制劑DKK的效果一致,當與FUT4 cDNA共轉染后可重新激活p-GSK3β、β-catenin的表達。當Anti-miR-200c抑制miR-200c的表達后可激活p-GSK3β、β-catenin的表達,與FUT4 siRNA共轉染后可重新抑制p-GSK3β、β-catenin的表達。
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 子宮內(nèi)膜癌中FUT1、FUT4、LeY寡糖抗原的表達及意義.pdf
- 山羊乳腺分泌上皮細胞單克隆培養(yǎng)及miR-200c對ACACA基因靶向調(diào)控研究.pdf
- miR-200c和miR-141在胃癌中表達、功能及其調(diào)節(jié)機制的研究.pdf
- miR-200c通過靶向DNMT3B抑制胃癌MGC-803細胞生長.pdf
- miR-224-3p靶向調(diào)控巖藻糖基轉移酶FUT4在乳腺癌多耐藥中的研究.pdf
- 56487.巖藻糖基轉移酶fut9、fut4和fut1基因在人子宮內(nèi)膜的表達及卵巢激素的調(diào)控
- miR-200b和miR-200c在人胃癌患者血清中的表達及其臨床意義.pdf
- MiR-200c通過靶向ZNF217與ZEB1抑制TGF-β信號并調(diào)控乳腺癌trastuzumab耐藥與轉移.pdf
- 外周血miR-200c在膀胱癌中應用價值初步研究.pdf
- miR-200c在膀胱癌上皮間質轉化作用機制的研究.pdf
- miR-200c在CIK細胞誘導的胃癌細胞凋亡中的作用研究.pdf
- 幽門螺桿菌對胃癌細胞標miR-200c和RhoA表達的影響.pdf
- 黃芩苷上調(diào)FUT4表達及促進胚胎著床機制的研究.pdf
- miR-200c通過調(diào)節(jié)細胞上皮-間質轉換改變肺癌細胞對克唑替尼的敏感性.pdf
- miR-200c在胃癌患者血清、組織中的表達及相關性研究.pdf
- miR-200c抑制卵巢癌侵襲、遷移及增殖等功能的研究.pdf
- MiR-200c與E-cadherin在人胃癌組織中的表達及意義.pdf
- MicroRNA-181a靶向PRKCD調(diào)節(jié)子宮頸鱗癌化療抵抗性的機制研究.pdf
- 小鼠子宮內(nèi)膜細胞FUT7的表達調(diào)控.pdf
- miR-200c對三陰性乳腺癌細胞系上皮間質轉化的影響.pdf
評論
0/150
提交評論