尼古丁致大鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞毒性的體內(nèi)外研究.pdf

1、本文對(duì)尼古丁致大鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞毒性的體內(nèi)外進(jìn)行了研究。尼古丁是香煙的一種主要成分，它能通過影響激素內(nèi)分泌而對(duì)睪丸產(chǎn)生毒性作用，甚至導(dǎo)致男性不育。為了研究尼古丁對(duì)睪丸間質(zhì)細(xì)胞造成的功能損傷，我們從大鼠睪丸中提取出了睪丸間質(zhì)細(xì)胞，并在5種濃度的尼古?。?、0.05、0.5、5、50μM）條件下對(duì)其進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)基的睪酮測(cè)量顯示尼古丁能減少睪丸間質(zhì)細(xì)胞的雄激素分泌。實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）和免疫印跡顯示尼古丁下調(diào)Cyp11a1，Hsd3

2、b1，Cyp17a1，Hsd17b3，Nr5a1的mRNA或蛋白水平。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)細(xì)胞周期，細(xì)胞凋亡信號(hào)，碘化丙啶（PI），線粒體膜電位（△Ψ m），活性氧類物質(zhì)（ROS）進(jìn)行分析，結(jié)果顯示對(duì)于睪丸間質(zhì)細(xì)胞，尼古丁能抑制其增殖，誘導(dǎo)凋亡，降低△Ψ m，提高ROS水平。在50μM尼古丁的條件下培養(yǎng)睪丸間質(zhì)細(xì)胞3h，并加上以下培養(yǎng)條件：沒有（基礎(chǔ)）或有1 ng/ml的黃體刺激素（LH），以及20μM的類固醇底物如：22R-羥膽固醇（22

3、R），孕烯醇酮(P5)，孕酮(P4)，和雄烯二酮（D4）睪酮（T）和雙氫睪酮（DHT）。培養(yǎng)基的5α-雄烷-3α，17β-二醇（DIOL）測(cè)量顯示尼古丁顯著性抑制基礎(chǔ)，22R， P5，D4， T和DHT誘導(dǎo)的DIOL分泌。進(jìn)行了體內(nèi)研究，連續(xù)14天對(duì)大鼠進(jìn)行尼古丁腹腔注射，尼古丁的劑量分別為0.5或1mg/kg，結(jié)果顯示在第7天和14天時(shí)尼古丁能顯著降低大鼠血清睪酮和黃體刺激素（FSH）的水平。這些趨勢(shì)得到qPCR結(jié)果的支持，qPCR結(jié)