多房棘球蚴抗原蛋白Emy162及TSP3的抗原表位的預測及鑒定.pdf

1、目的：預測并鑒定分析多房棘球絳蟲抗原蛋白Emy162及TSP3的B細胞和T細胞（Th1型、Th2型、Th17型）優(yōu)勢抗原表位，為后續(xù)抗多房棘球蚴多表位疫苗的研制奠定基礎。
　　方法：⑴Genbank獲取 Emy162、TSP3的氨基酸序列后通過生物信息學軟件 SOPMA預測二級結(jié)構(gòu)特征，進一步通過在線軟件IEDB、SYFPEITHI、Bcepred和 ABCpred預測潛在的T細胞和 B細胞表位。⑵收集Emy162蛋白、TSP3蛋

2、白、PBS分別免疫后的BALB/c小鼠得脾臟淋巴細胞，并用化學合成的抗原小肽進行刺激共培養(yǎng)。通過脾臟淋巴細胞增殖實驗、培養(yǎng)上清與病人血清 ELISA實驗，鑒定出具有良好免疫原性的B細胞抗原表位。⑶人工合成的T細胞抗原小肽刺激Emy162蛋白、TSP3蛋白、PBS致敏小鼠脾臟淋巴細胞，通過 ELISA、ELISpot、流式細胞術等方法檢測Th1、Th2、Th17型細胞因子的表達，鑒定出具有良好免疫原性Th1、Th2、Th17型細胞抗原表位

3、。
　　結(jié)果：①Emy16、TSP3蛋白均存在潛在優(yōu)勢抗原性表位存在。Emy162的8個潛在優(yōu)勢 B細胞表位為E7-13、E19-27、E28-36、E37-48、E78-83、E101-109、E112-121、E129-139；Emy162的6個T細胞潛在優(yōu)勢抗原表位為E7-13、E36-41、E80-89、E87-96、E97-106、E129-139。TSP3的7個B細胞潛在優(yōu)勢抗原表位分別為T18-33、T45-55、T

4、53-63、T64-75、T80-90、T92-104、T110-122；TSP3蛋白的8個T細胞表位是T33-42、T45-55、T53-63、T68-77、T80-90、T92-104、T110-122、T134-144。②Emy162、TSP3蛋白各B抗原表位的抗原性不同。Emy162的3個優(yōu)勢 B抗原表位為 E19-27、E112-121、E129-139；TSP3的3個優(yōu)勢B抗原表位為 T18-33、T45-55、T110-1

5、22。③Emy162蛋白各 T抗原表位可誘導不同細胞因子的表達。E7-13、E36-41、E80-89、E129-139為Emy162的Th1型優(yōu)勢抗原表位；E36-41、E87-96、E97-106為Emy162的Th2型優(yōu)勢抗原表位；E36-41、E87-96、E97-106為Emy162的Th17型優(yōu)勢抗原表位。④TSP3蛋白各T抗原表位可誘生不同細胞因子的表達。TSP3的優(yōu)勢 Th1型抗原表位為 T33-42、T45-55、T8

6、0-90、T110-122；TSP3的Th2型優(yōu)勢抗原表位為 T45-55、T68-77、T92-104；TSP3的Th17型優(yōu)勢抗原表位為 T53-60、T80-90。
　　結(jié)論：⑴Emy162及 TSP3具有良好的抗原性，并存在潛在優(yōu)勢抗原表位。利用生物信息學的方法預測分析出了 Emy162的8個 B細胞表位和6個T細胞表位，預測分析出 TSP3蛋白8個 T細胞和7個 B細胞表位。⑵Emy162蛋白具有3個優(yōu)勢 B細胞表位、4