李果實蘋果酸轉(zhuǎn)運體的克隆表達及其有機酸的關(guān)聯(lián)性分析.pdf

1、有機酸是決定果實品質(zhì)的重要因子，參與了果實風(fēng)味、色澤、香氣的形成，在果實中的組成、轉(zhuǎn)運與積累機理是果實品質(zhì)研究的重要課題。果實細胞中，蘋果酸轉(zhuǎn)運蛋白 tDT（ tonoplast dicarboxylate transporter）和蘋果酸跨膜離子通道蛋白 ALMT（almuminum-activated malate transporter）基因家族介導(dǎo)胞質(zhì)中蘋果酸跨膜轉(zhuǎn)運，對果實有機酸積累與降解機理研究具有重要意義。本研究通過‘皇冠

2、李’、‘西瓜李’、‘黑琥珀’和‘葡萄李’等四個代表性品種，應(yīng)用超高效液相色譜（UPLC）進行果實有機酸組分與含量的分析；通過同源克隆了一個液泡膜蘋果酸轉(zhuǎn)運蛋白tDT-like基因和兩個蘋果酸轉(zhuǎn)運離子通道ALMT4-like、ALMT9-like基因，并應(yīng)用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測tDT-like、ALMT4-like和 ALMT9-like基因在4個代表性品種中的5個發(fā)育階段的基因表達水平，并通過 pearson相關(guān)分析和回歸建模系統(tǒng)

3、地分析了李果實細胞蘋果酸跨膜轉(zhuǎn)運基因與各有機酸組分的關(guān)聯(lián)性，主要研究結(jié)果如下：
　　1.李果實生長發(fā)育過程中pH變化呈V型變化，TA呈倒V型變化。黑琥珀、皇冠李、西瓜李的pH變化V型趨勢明顯，葡萄李變化較小。pH值大小順序為：成熟期，葡萄李＞黑琥珀≈西瓜李＞皇冠李，完熟期，葡萄李＞黑琥珀＞皇冠李≈西瓜李；TA變化與pH相似，黑琥珀、皇冠李、西瓜李的T倒V趨勢明顯，葡萄李變化較小，成熟期和完熟期果實的總酸大小順序為：西瓜李＞皇冠李＞

4、黑琥珀＞葡萄李。高酸和低酸品種的差異主要表現(xiàn)為低酸品種酸降較快或時間較長，反之則酸降較慢或時間較短。
　　2.蘋果酸是李果實中主要的有機酸，占總酸含量的57％~84%，李屬于典型的蘋果酸型果實；其次是酒石酸，個別品種（如西瓜李）高達18%~36%；而果實中的檸檬酸、琥珀酸、草酸、乙酸、富馬酸只以少量或微量存在。4個測試品成熟期果實蘋果酸含量順序為：皇冠李＞西瓜李≈黑琥珀＞葡萄李。
　　3.蘋果酸轉(zhuǎn)運體基因?qū)Σ煌贩N果實蘋果酸

5、的調(diào)控作用有所差異。tDT-like基因?qū)Ω咛O果酸含量品種（如皇冠李、西瓜李）果實酸的積累起到一定程度的正向調(diào)控作用，對低蘋果酸含量品種（如葡萄李）的調(diào)控作用不明顯。ALMT9-like基因?qū)Σ煌贩N李果實蘋果酸的積累均表現(xiàn)為負向調(diào)控作用。ALMT4-like基因?qū)使诶?、西瓜李、葡萄李的蘋果酸積累起到起促進作用，但對黑琥珀的蘋果酸積累起到負向調(diào)控作用。
　　4.蘋果酸轉(zhuǎn)運體與有機酸組分的關(guān)聯(lián)性分析結(jié)果顯示，ALMT4-like基